摘  要：本發(fā)明屬于中藥活性提取物制備領(lǐng)域，具體涉及一種羅布麻葉提取物及其制備方法和應(yīng)用，其中，羅布麻葉提取物為羅布麻葉Fr.BuOH部位提取物或者利用40％乙醇(v/v)洗脫Fr.BuOH部位得到的Fr.BuOH-40％部位提取物；其活性組分包括金絲桃苷和異槲皮苷。本發(fā)明進(jìn)一步針對(duì)羅布麻葉進(jìn)行二次開發(fā)，通過活性導(dǎo)向的提取分離方法，找到兩個(gè)活性部位Fr.BuOH和Fr.BuOH-40％，其中金絲桃苷和異槲皮苷的總含量高；基于斑馬魚評(píng)價(jià)模型，這兩個(gè)活性部位對(duì)鹽酸維拉帕米誘導(dǎo)的心臟損傷(心包水腫和靜脈淤血)具有顯著的改善用，并且相同濃度下，與市售復(fù)方丹參滴丸的功效相當(dāng)。

 

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于中藥活性提取物制備領(lǐng)域，具體涉及一種羅布麻葉提取物及其制備方法和應(yīng)用。

 

背景技術(shù)

羅布麻(Apocynum venetum L.)是夾竹桃科羅布麻屬亞灌木，2020版《中國(guó)藥典》記載，羅布麻葉甘、苦，涼，歸肝經(jīng)，具有“平肝安神，清熱利水”之功效，主要用于治療“肝陽眩暈，心悸失眠，浮腫尿少”，即現(xiàn)代醫(yī)學(xué)用語中的高血壓病?，F(xiàn)已批準(zhǔn)的55個(gè)含有羅布麻葉的中成藥的主要功效也以降血壓為主，對(duì)于羅布麻葉及提取物的活血化瘀作用未有相關(guān)報(bào)道。

《中國(guó)藥典》規(guī)定羅布麻葉的指標(biāo)成分為金絲桃苷，又名槲皮素?3?O?β?D?吡喃半乳糖苷，具有較廣泛的心血管相關(guān)活性報(bào)道。此外，金絲桃苷的同分異構(gòu)體異—槲皮苷(槲皮素?3?O?β?D?吡喃葡萄糖苷)，也表現(xiàn)出廣泛的心血管活性。金絲桃苷和異槲皮苷二者的母核均為槲皮素，而前者的糖取代基是吡喃半乳糖，后者的糖取代基是吡喃葡萄糖。中國(guó)專利CN111150741A公開了金絲桃苷減輕人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的醫(yī)藥用途，提供了金絲桃苷單用或與其他藥物聯(lián)用在制備預(yù)防和治療氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷引起的動(dòng)脈粥樣硬化、心絞痛、心力衰竭和高血壓疾病的藥物中的應(yīng)用。中國(guó)專利CN106474139A公開了一種用于肺源性心臟病緩解期的片劑及其制備方法，其中，片劑主要由珊瑚菜素、中美菊素C、丹參酮、薏苡素、金絲桃苷、巖白菜素、葛根素、甘草甜素、隱黃素、蕓香苷、茯苓多糖、巖藻糖、N?乙酰氨基葡萄糖、兒茶素成分組成，針對(duì)肺源性心臟病緩解期的治療能起到預(yù)防感染、控制心律失常和心力衰竭的作用，同時(shí)可以抵抗誘發(fā)因素，增強(qiáng)患者肌體的免疫能力，預(yù)防復(fù)發(fā)，加快患者心肺功能恢復(fù)來減緩精神負(fù)擔(dān)?，F(xiàn)有研究中，還未有針對(duì)羅布麻葉提取物的活血化瘀及心臟保護(hù)等方面的研究。

大量文獻(xiàn)表明，斑馬魚模型在篩選心臟保護(hù)活性成分方面具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，斑馬魚心臟在結(jié)構(gòu)、功能、信號(hào)通路和離子通道方面與人類心臟高度相似；血脂組成、代謝與人類的基本一致；且胚胎及其幼體近乎透明，心血管可視，可活體觀察心跳、血管形成和血管病變。

基于此，本發(fā)明制備一種羅布麻葉提取物，并采用鹽酸維拉帕米誘導(dǎo)斑馬魚心臟損傷模型，驗(yàn)證羅布麻葉提取物及其主要單體化學(xué)成分在改善藥物引起的心包水腫和靜脈淤血方面的作用功效，為其臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

 

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問題，提出了一種羅布麻葉提取物及其制備方法和應(yīng)用，進(jìn)一步針對(duì)羅布麻葉進(jìn)行二次開發(fā)，通過活性導(dǎo)向的提取分離方法，找到兩個(gè)活性部位Fr.BuOH和Fr.BuOH?40％，其中金絲桃苷和異槲皮苷的總含量高；基于斑馬魚評(píng)價(jià)模型，這兩個(gè)活性部位對(duì)鹽酸維拉帕米誘導(dǎo)的心臟損傷(心包水腫和靜脈淤血)具有顯著的改善作用，與羅布麻葉總提取物的活性要好很多，并且相同濃度下，優(yōu)于單體一化學(xué)成分金絲桃苷或異槲皮苷，且與市售復(fù)方丹參滴丸的功效相當(dāng)。

本發(fā)明的技術(shù)方案是：

本發(fā)明保護(hù)羅布麻葉提取物在制備預(yù)防和/或改善和/或治療心臟損傷的藥物中的應(yīng)用。

進(jìn)一步的，所述應(yīng)用包括如下任一種或幾種：

(1)制備預(yù)防和/或改善和/或治療心包水腫的藥物；

(2)制備預(yù)防和/或改善和/或治療靜脈淤血的藥物；

(3)制備預(yù)防和/或改善和/或治療鹽酸維拉帕米誘導(dǎo)的心包水腫或靜脈淤血的藥物；

(4)制備預(yù)防和/或改善和/或治療鹽酸維拉帕米誘導(dǎo)的斑馬魚心臟損傷模型癥狀 的藥物。

本發(fā)明還保護(hù)所述的羅布麻葉提取物，所述羅布麻葉提取物為羅布麻葉Fr.BuOH部位提取物；其活性組分包括金絲桃苷和異槲皮苷。優(yōu)選地，所述羅布麻葉提取物為利用40％乙醇(v/v)洗脫Fr.BuOH部位得到的Fr.BuOH-40％部位提取物。

進(jìn)一步的，所述的羅布麻葉提取物的制備方法，包括如下步驟：

干燥的羅布麻葉粉碎過篩，按照液料比(8～10)：1的比例加入95％乙醇，超聲提取2～4次，每次提取50～70min，合并濾液后減壓濃縮，得到Fr.95％EtOH提取部位；將Fr.95%EtOH提取部位充分分散于水中，依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到Fr.EtOAC部位、Fr.BuOH部位和Fr.H2O部位；利用40％乙醇(v/v)洗脫Fr.BuOH部位，得到Fr.BuOH-40％提取部位。

本發(fā)明還保護(hù)一種預(yù)防和/或改善和/或治療心臟損傷的中藥組合物，其活性成分為所述的羅布麻葉提取物或者采用所述的制備方法制得的羅布麻葉提取物。

本發(fā)明還保護(hù)所述的羅布麻葉提取物在制備心臟保護(hù)藥物或者活血祛瘀藥物中的應(yīng)用。

進(jìn)一步的，所述應(yīng)用包括如下任一種或幾種：

(1)制備活血祛瘀的中藥藥物；

(2)制備具有心臟保護(hù)作用的中藥藥物。

本發(fā)明的有益效果：

(1)本發(fā)明通過活性導(dǎo)向的提取分離方法，發(fā)現(xiàn)了羅布麻葉的2個(gè)活性部位 Fr.BuOH和Fr.BuOH-40％，并通過斑馬魚評(píng)價(jià)模型發(fā)現(xiàn)，這兩個(gè)活性部位提取物可以顯著改善鹽酸維拉帕米誘導(dǎo)的心臟損傷，拓展了羅布麻葉的應(yīng)用范圍。 (2)Fr.BuOH亞部位和Fr.BuOH-40％亞部位中活性成分金絲桃苷和異槲皮苷的總 含量分別為20.41％和36.81％，比95％EtOH部位分別提高了7.21倍和13.01倍，且遠(yuǎn)高于藥典規(guī)定的金絲桃苷0.3％的含量標(biāo)準(zhǔn)。

(3)本發(fā)明基于斑馬魚評(píng)價(jià)模型驗(yàn)證了Fr.BuOH和Fr.BuOH-40％兩個(gè)活性部位對(duì) 鹽酸維拉帕米誘導(dǎo)的心臟損傷(具體是心包水腫和靜脈淤血)具有顯著的改善作用，比羅布麻葉95％乙醇總提取物和單一成分金絲桃苷或異槲皮苷的活性要好很多；并且在相同濃度下，本發(fā)明羅布麻葉提取物的活性與市售復(fù)方丹參滴丸的功效相當(dāng)，未來可用來開發(fā)相關(guān)的活血祛瘀類中藥新藥。

 

 

附圖說明

圖1為羅布麻葉不同極性部位的HPLC色譜圖(檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm)，其中，部位A：Fr.95% EtOH；部位B：Fr.BuOH部位；C：Fr.BuOH-40％部位；

                       

圖1

圖2為金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)曲線圖；

  

圖2

圖3為羅布麻葉Fr.BuOH部位對(duì)斑馬魚存活率、心包水腫和靜脈淤血面積改善功效評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)結(jié)果；

  

圖3

圖4為羅布麻葉Fr.BuOH-40％部位對(duì)斑馬魚存活率、心包水腫和靜脈淤血面積改善功效評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)結(jié)果；

  

圖4

圖5為羅布麻葉Fr.BuOH部位、Fr.BuOH-40％部位、金絲桃苷和異槲皮苷的活性比較。

  

圖5

 

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

為了進(jìn)一步理解本發(fā)明，將結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。

實(shí)施例1

羅布麻葉提取物的制備方法，包括以下步驟：

(1) 活性部位的提取制備

羅布麻葉自然晾干，粉碎后過50目篩，取100g干粉用95％乙醇超聲提取2次(頻率40KHz)，每次60min，液料比為10：1，8：1，合并濾液后，減壓濃縮，回收溶劑，得12.02g乙醇提取物(即Fr.95％EtOH部位)，提取率為12.02％。

 將上述Fr.95％EtOH部位充分分散于500mL蒸餾水中，依次用乙酸乙酯和正丁醇溶液萃取，減壓濃縮，回收溶劑得2.68g乙酸乙酯提取物(即Fr.EtOAC部位)，2.51g正丁醇提取物(即Fr.BuOH部位)。剩余6.7g水提取物(即Fr.H2部位)。

 將上述Fr.BuOH部位在HP-20大孔吸附樹脂柱上依次用蒸餾水、10％乙醇(v/v)、 20％乙醇(v/v)、30％乙醇(v/v)、40％乙醇(v/v)、60％乙醇(v/v)、80％乙醇(v/v)和100%乙醇(v/v)洗脫，減壓濃縮，回收溶劑。最終驗(yàn)證得到40％乙醇(v/v)洗脫后的Fr.BuOH部位(即Fr.BuOH-40％部位)中活性最高，其質(zhì)量為0.30g。

(2)活性部位的HPLC定性表征

準(zhǔn)確稱量Fr.95％EtOH部位、Fr.BuOH部位、Fr.BuOH-40％部位的樣品各10mg，加入1mL體積的甲醇-水(v/v，60:40)溶解。以上樣品均經(jīng)0 .22μm微孔濾膜過濾，作為供試品溶液，與市售對(duì)照品溶液(綠原酸對(duì)照品、金絲桃苷對(duì)照品和異槲皮苷對(duì)照品)，進(jìn)HPLC進(jìn)行分析，進(jìn)樣體積為15μL。

設(shè)置HPLC色譜條件為：流動(dòng)相為甲醇(A)和0.1％三氟乙酸水溶液(B)；5％～95%甲醇等梯度洗脫45min；柱溫40℃。

如圖1所示，HPLC定性表征結(jié)果顯示，經(jīng)與市售對(duì)照品對(duì)比后發(fā)現(xiàn)，羅布麻葉Fr.95％EtOH部位以綠原酸、金絲桃苷和異槲皮苷3個(gè)成分的相對(duì)含量最高，其HPLC保留時(shí)間分別為14.70min，23.04min，23.31min。Fr.BuOH部位中三個(gè)主成分的相對(duì)含量明顯增多；而Fr.BuOH-40％部位基本無綠原酸，主要含金絲桃苷和異槲皮苷。

(3)活性部位主要成分定量檢測(cè)

由于金絲桃苷和異槲皮苷的母核完全一致，僅糖苷部分不同，是一對(duì)同分異構(gòu)體。二者在常規(guī)HPLC色譜柱無法有效分離。本部分以金絲桃苷為標(biāo)準(zhǔn)品計(jì)算金絲桃苷和異槲皮苷兩個(gè)主要化學(xué)成分的總含量。

首先繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，精密稱取金絲桃苷對(duì)照品5.00mg，置5m容量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻即得1000μg/mL儲(chǔ)備液。用甲醇稀釋，獲得7種濃度樣品，分別為50μg/mL，100μg/mL，200μg/mL，300μg/mL，400μg/mL，600μg/mL，800μg/mL，在步驟(2)的HPLC色譜條件下，進(jìn)樣10μL，記錄色譜峰面積。以濃度值(μg/mL)為橫坐標(biāo)，以峰面積(mAU)為縱坐 標(biāo)，繪制金絲桃苷對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線。

HPLC定量結(jié)果發(fā)現(xiàn)：金絲桃苷進(jìn)樣量在0.5～8.0μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，回歸方程：Y＝28964X-932918，R2＝0.9999。標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖2。Fr.95％EtOH部位、Fr.BuOH部位、Fr.BuOH-40％部位中金絲桃苷和異槲皮苷總的百分含量分別為：2.83％，20.41％，36.81%(見表1)。

表1羅布麻葉不同提取部位中金絲桃苷的含量

  

試驗(yàn)例1斑馬魚對(duì)Fr.BuOH部位、Fr.BuOH-40％部位、金絲桃苷和異槲皮苷的最大耐受濃度

選取受精2dpf且發(fā)育正常的野生型AB品系斑馬魚幼魚于6孔板，每孔30尾，分別加入用DMSO溶解的樣品，其中，F(xiàn)r.BuOH組的終濃度分別為：2500、2000、1500、1000、500、250、125μg/mL；Fr.BuOH-40％組的終濃度分別為：2000、1750、1000、750、500、250、125μg/mL，金絲桃苷組的終濃度分別為：2000、1500、1000、500、250、125、62.5μg/mL，異槲皮苷組的終濃度分別為：1000、900、800、700、600、500、400μg/mL。以斑馬魚實(shí)驗(yàn)用水作為對(duì)照組。將加藥后的6孔板置于28.5℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，觀察并記錄斑馬魚狀態(tài)，統(tǒng)計(jì)其死亡率及畸形率 。

如圖3A和圖4A所示，F(xiàn)r.BuOH部位、Fr.BuOH-40％部位的半數(shù)致死濃度(LC50)分別為：1621 .6μg/mL、937.2μg/mL。顯微鏡下觀察各濃度下斑馬魚表型，F(xiàn)r.BuOH部位1000μg/mL濃度下無斑馬魚死亡，但是全數(shù)斑馬魚頭部，卵黃囊部位均出現(xiàn)不同程度的畸形，500μg/mL濃度下部分斑馬魚出現(xiàn)畸形。250μg/mL濃度及以下斑馬魚形態(tài)指標(biāo)均表現(xiàn)正常。斑馬魚在Fr.BuOH-40％部位500μg/mL及以上濃度均出現(xiàn)不同程度的畸形與死亡，250μg/mL濃度及以下斑馬魚形態(tài)指標(biāo)均表現(xiàn)正常?；谏鲜鼋Y(jié)果，將Fr.BuOH部位和Fr.BuOH-40％部位的最終給藥濃度均控制在500μg/mL以內(nèi)。同樣的，基于上述結(jié)果，將試驗(yàn)例2和試驗(yàn)例3中Fr.BuOH部位和Fr.BuOH-40％部位的最終給藥濃度均控制在500μg/mL以內(nèi)。

在考察金絲桃苷和異槲皮苷的最大耐受濃度時(shí)，發(fā)現(xiàn)當(dāng)金絲桃苷的給藥濃度達(dá)到1500μg/mL，異槲皮苷的給藥濃度達(dá)到800μg/mL時(shí)，6孔板中會(huì)出現(xiàn)藥物析晶，但在此濃度下，金絲桃苷和異槲皮苷組的斑馬魚形態(tài)指標(biāo)均表現(xiàn)正常。因此，在試驗(yàn)例2和試驗(yàn)例3中，將金絲桃苷和異槲皮苷的最終給藥濃度需分別控制在1500μg/mL和800μg/mL以內(nèi)。

試驗(yàn)例2 Fr.BuOH部位、Fr.BuOH-40％部位對(duì)斑馬魚心包水腫面積和靜脈淤血面積的改善作用

設(shè)置兩組獨(dú)立實(shí)驗(yàn)，分別評(píng)價(jià)Fr.BuOH部位、Fr.BuOH-40％部位對(duì)斑馬魚心臟損傷的保護(hù)作用。選取受精2dpf且發(fā)育正常的野生型AB品系斑馬魚于6孔板，每孔30尾，每孔用實(shí)驗(yàn)用水定容至3mL。設(shè)置正常組、模型組、陽性藥組，以及不同濃度的給藥組。正常組僅用實(shí)驗(yàn)用水處理，模型組用20μg/mL鹽酸維拉帕米處理20min，陽性藥組首先用復(fù)方丹參滴丸水溶液(保持終濃度與給藥組最大劑量一致)給藥處理4h，然后加鹽酸維拉帕米處理20min。給藥組分別加入100μg/mL、50μg/mL濃度的Fr.BuOH部位和125μg/mL、62.5μg/mL濃度的  Fr.BuOH-40％部位，給藥處理4h；除正常組外，再分別給各組加入鹽酸維拉帕米處理20min。每組隨機(jī)選取10尾斑馬魚，用甲基纖維素固定于載玻片上，調(diào)整為側(cè)臥位使心房、心室充分暴露，在體視顯微鏡下進(jìn)行白光拍照記錄(放大倍數(shù)為5倍)。采用Image J軟件分析斑馬魚心包水腫面積和靜脈淤血面積。

如圖3B和3C所示，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組斑馬魚的心包水腫和靜脈淤血面積顯著降低(P＜0.001，P＜0.001)，表明鹽酸維拉帕米成功誘導(dǎo)斑馬魚心臟損傷。與模型組相比，F(xiàn)r.BuOH部位在100μg/mL(P<0.05，P<0.05)和50μg/mL(P<0.01，P<0.05)濃度下對(duì)斑馬魚心包水腫面積和靜脈淤血面積的改善效果顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。100μg/mL濃度的Fr.BuOH部位改善斑馬魚靜脈淤血面積的作用效果優(yōu)于同濃度下的陽性藥復(fù)方丹參滴丸(P ＜0.05)，改善斑馬魚心包水腫面積的作用效果與同濃度的復(fù)方丹參滴丸相當(dāng)(P＜0.05)。

如圖4B和4C所示，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組斑馬魚的心包水腫和靜脈淤血面積顯著降低(P＜0.001，P＜0.001)，表明鹽酸維拉帕米成功誘導(dǎo)斑馬魚心臟損傷。與模型組相比，F(xiàn)r.BuOH-40％部位在125μg/mL(P<0.05，P<0 .05)和62.5μg/mL(P<0.01，P<0 .01)濃度下對(duì)斑馬魚心包水腫面積和靜脈淤血面積的改善效果具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。125μg/mL濃度的BuOH-40％部位與同濃度下復(fù)方丹參滴丸作用相當(dāng)；62.5μg/mL濃度的BuOH-40％部位對(duì)斑馬魚心臟損傷的作用效果明顯優(yōu)于125μg/mL濃度的陽性藥復(fù)方丹參滴丸(P＜0.01， P＜0.01)。

試驗(yàn)例3 Fr.BuOH部位、Fr.BuOH-40％部位與單體化學(xué)成分金絲桃苷、異槲皮苷的活性差異

再設(shè)置1組獨(dú)立實(shí)驗(yàn)，評(píng)價(jià)相同給藥濃度下，F(xiàn)r.BuOH部位、Fr.BuOH-40％部位與單體化學(xué)成分金絲桃苷、異槲皮苷改善斑馬魚心臟損傷作用效果的差異。

選取受精2dpf且發(fā)育正常的野生型AB品系斑馬魚于6孔板，每孔30尾，每孔用實(shí)驗(yàn)用水定容至3mL。設(shè)置正常組、模型組、陽性藥組，以及不同濃度的給藥組。正常組僅用實(shí)驗(yàn)用水處理；模型組用20μg/mL鹽酸維拉帕米處理20min；陽性藥組首先用100μg/mL的復(fù)方丹參滴丸水溶液給藥處理4h，然后加鹽酸維拉帕米處理20min；給藥組分別加入100μg/mL濃度的Fr.BuOH部位、Fr.BuOH-40％部位、金絲桃苷和異槲皮苷，給藥處理4h；除正常組外，再分別給各組加入鹽酸維拉帕米處理20min。每組隨機(jī)選取10尾斑馬魚，用甲基纖維素固定于載玻片上，調(diào)整為側(cè)臥位使心房、心室充分暴露，在體視顯微鏡下進(jìn)行白光拍照記錄(放大倍數(shù)為5倍)。采用Image J軟件分析斑馬魚心包水腫面積和靜脈淤血面積。

如圖5A和5B所示，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組斑馬魚的心包水腫和靜脈淤血面積顯著降低(P＜0.01，P＜0.001)，表明鹽酸維拉帕米成功誘導(dǎo)斑馬魚心臟損傷。與模型組相比，100μg/mL濃度的Fr.BuOH部位(P＜0.05，P＜0.01)、Fr.BuOH-40％部位(P＜0.01，P ＜0.01)、金絲桃苷(P＜0.05)和異槲皮苷(P＜0.01，P＜0.01)對(duì)斑馬魚心包水腫面積和靜  脈淤血面積的改善作用效果顯著，除金絲桃苷組外均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中，F(xiàn)r.BuOH部位、Fr.BuOH-40％部位的作用效果均顯著優(yōu)于金絲桃苷，且略強(qiáng)于異槲皮苷。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，同濃度下，F(xiàn)r.BuOH部位和Fr.BuOH-40％部位對(duì)鹽酸維拉帕米誘導(dǎo)的斑馬魚心臟損傷的作用效果要優(yōu)于單一化學(xué)成分金絲桃苷和異槲皮苷。

上述說明僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，并非是對(duì)本發(fā)明的限制，盡管參照前述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，其依然可以對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改型等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。

 

文章摘自國(guó)家發(fā)明專利，一種羅布麻葉提取物及其制備方法和應(yīng)用，發(fā)明人：緒擴(kuò)，付先軍，謝文麗，任夏，申請(qǐng)?zhí)枺?/font>202410126668.4，申請(qǐng)日：2024.01.30