摘  要: 本發(fā)明屬于植物活性蛋白提取領(lǐng)域,具體公開了一種從脫殼亞麻籽中提取活性蛋白的方法;包括原料選擇?粒徑篩分?清洗去雜?微波烘干?脫殼處理?分離?色選?預(yù)處理?冷榨除油?超臨界萃取除油?酶解去雜?離心?重溶?純化和凍干等步驟?通過精細(xì)的分級篩選和多次純化過程,最終得到高純度?特定分子量范圍的活性蛋白;在進(jìn)一步的研究中發(fā)現(xiàn)上述的活性蛋白具有提高低濃度布地奈德的抗過敏效果,作為一種活性添加劑,可以提高布地奈德的治療效果,降低布的奈德含量,降低攝入量,降低布地奈德的副作用。

 

權(quán)利要求書

1.一種從脫殼亞麻籽中提取活性蛋白的方法,其特征在于,包括以下步驟:

1)原料選擇:選用新鮮?無霉變的帶殼亞麻籽;

2)粒徑篩分:根據(jù)粒徑大小對帶殼亞麻籽進(jìn)行分級篩選預(yù)處理,以便后續(xù)脫殼步驟更均勻和高效;

3)清洗去雜:對篩選后的某一分級的帶殼亞麻籽進(jìn)行清洗;

4)微波烘干;使用分段微波烘干,使得帶殼亞麻籽處于適合脫殼狀態(tài);

5)脫殼處理:使用脫殼機進(jìn)行撞擊脫殼;

6)分離脫殼亞麻籽:依據(jù)脫殼亞麻籽的粒徑和亞麻籽殼的粒徑的差別,調(diào)節(jié)篩網(wǎng)篩孔大小,盡量分離得到較純的脫殼亞麻籽;

7)色選:使用色選機,將脫殼亞麻籽中的雜質(zhì)和不良品篩除,得到亞麻籽原料;

8)預(yù)處理:將亞麻籽原料進(jìn)行清洗,并干燥;

9)冷榨除油:將預(yù)處理之后的亞麻籽原料進(jìn)行冷榨,分離亞麻籽油和亞麻籽餅;10)超臨界萃取除油:對亞麻籽餅進(jìn)行干燥,并進(jìn)一步粉碎,過100200目篩,得到亞麻籽粉,將亞麻籽粉加入超臨界萃取裝置中使用超臨界流體進(jìn)行萃取其中的油脂成分,得到除油后的亞麻籽粉;

11)酶解去雜:將亞麻籽粉溶于水中,加入纖維素酶?果膠酶和淀粉酶進(jìn)行酶解,超聲酶解,得到酶解液;

12)離心:1500030000g離心,取得沉淀;

13)重溶:將沉淀干燥后,再次溶解在去離子水中,使用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH4.25.5之間,2000030000g離心收集沉淀;

14)純化:將沉淀重溶,使用分子篩,截取其中分子量5070kD分子量的蛋白溶液;

15)凍干:將步驟14)得到的特定分子量范圍的蛋白溶液濃縮后凍干,得到活性蛋白。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從脫殼亞麻籽中提取活性蛋白的方法，其特征在于，所述步驟4)微波烘干，包括以下步驟：

第一階段：控制微波功率，使得溫度4555℃,保持510min；

第二階段：控制微波功率，使得溫度5565℃,保持36min；

第三階段：控制微波功率，使得溫度8090℃，保持25min；

第四階段：循環(huán)第一到第三階段2到3次，完成烘干步驟。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從脫殼亞麻籽中提取活性蛋白的方法，其特征在于，所述步驟8)預(yù)處理中，干燥使得亞麻籽原料的含水率在1018%之間。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從脫殼亞麻籽中提取活性蛋白的方法，其特征在于，所述步驟10)超臨界萃取除油中，所述干燥使得亞麻籽餅含水率在69%之間。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從脫殼亞麻籽中提取活性蛋白的方法，其特征在于，所述步驟10)超臨界萃取除油中，使用超聲波萃取裝置SFT110XW，使用二氧化碳為超臨界流體，設(shè)定萃取溫度3236℃?萃取壓力3040Mpa；完成萃取后，逐漸降低系統(tǒng)內(nèi)的壓力，得到除油后的亞麻籽粉。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從脫殼亞麻籽中提取活性蛋白的方法，其特征在于，所述11)酶解去雜中，按1g亞麻籽粉溶于1020mL水中的比例投料，并使得纖維素酶的濃度為100200U/mL、果膠酶150250U/mL和淀粉酶200400U/mL,酶解溫度為3842℃，酶解時同步進(jìn)行超聲，超聲功率100W/L，超聲頻率2540kHz。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從脫殼亞麻籽中提取活性蛋白的方法，其特征在于，所述步驟14)純化中，所述的分子篩的型號為SephadexG75，上樣的粗蛋白濃度為0.10.2g/mL，流動相為PBS緩沖液。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從脫殼亞麻籽中提取活性蛋白的方法，其特征在于，所述步驟15)凍干中，凍干程序如下：a預(yù)凍：物料攤鋪開進(jìn)行預(yù)凍，攤鋪厚度在24cm，在常壓下進(jìn)行快速預(yù)凍，預(yù)凍時間6080min，預(yù)凍溫度35~55℃；b冷凍干燥：凍干程序如下：A:55~65℃，壓強550750Pa，凍干4575min;B:65~75℃，壓強120220Pa,凍干100140min;C:75~85℃，壓強70120Pa,凍干1020min；D：恢復(fù)到常溫常壓，干燥至含水量低于5％，得到活性蛋白。

9.一種活性蛋白，其特征在于，由權(quán)利要求18任一項所述的方法制備得到。

10.如權(quán)利要求9所述的活性蛋白在制備抗過敏噴霧中的用途，其特征在于，所述抗過敏噴霧中含有布地奈德和活性蛋白，所述布地奈德濃度為0.32mg/mL,所述活性蛋白濃度為0.10.4mg/mL。

 

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物活性蛋白提取領(lǐng)域，具體公開了一種從脫殼亞麻籽中提取活性蛋白的方法。

 

背景技術(shù)

亞麻籽活性蛋白具有多種用途,這些用途主要基于其豐富的營養(yǎng)成分和獨特的生物活性。

1.優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)來源:亞麻籽活性蛋白是一種優(yōu)質(zhì)的植物性蛋白質(zhì)來源,含有人體所需的全部必需氨基酸,且氨基酸結(jié)構(gòu)優(yōu)于大豆蛋白。這使得它成為素食者?運動員及需要高蛋白飲食人群的理想選擇。

2.提高免疫力:攝入優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)能夠顯著提高人體免疫力,增強身體抵抗力,預(yù)防疾病的發(fā)生。

3.抗氧化作用:亞麻籽中的木酚素等活性成分具有很強的抗氧化能力,可以清除體內(nèi)自由基,延緩衰老過程,保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷。

4.心血管健康:亞麻籽活性蛋白及其所含的木酚素等成分有助于降低膽固醇水平,抑制動脈粥樣硬化,從而維護(hù)心血管系統(tǒng)的健康。

5.腦功能提升:亞麻籽油中富含的α亞麻酸是構(gòu)成大腦細(xì)胞膜的重要成分之一,對嬰幼兒的智力發(fā)育?青少年提高記憶力以及中老年健腦具有重要作用。

6.抗癌作用:研究表明,亞麻籽中的某些成分如木酚素具有抗腫瘤活性,尤其對抗前列腺癌?乳腺癌和結(jié)腸癌等有顯著效果。

7.調(diào)節(jié)雌激素水平:木酚素作為一種植物雌激素,可以幫助女性調(diào)節(jié)體內(nèi)雌激素的平衡,緩解因激素水平變化引起的不適癥狀。布地奈德是一種具有抗炎和抗過敏作用的吸入性糖皮質(zhì)激素類藥物,能夠治療過敏性鼻炎,但是使用布地奈德后可能會出現(xiàn)輕度喉部刺激?咳嗽?聲音嘶啞等癥狀。長期使用還可能導(dǎo)致口咽部念珠菌感染,如何降低布地奈德的使用劑量,降低布地奈德的副作用,也是目前的熱門研究項目,目前尚無將亞麻籽活性蛋白和布地奈德合用的報道。

 

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述問題，本發(fā)明公開了一種從脫殼亞麻籽中提取活性蛋白的方法，使用獨特的工藝提取脫殼亞麻籽蛋白中5070kD的活性蛋白，上述的活性蛋白具有提高低濃度布地奈德的抗過敏效果，作為一種活性添加劑，可以提高布地奈德的治療效果，降低布的奈德含量，降低攝入量，降低布地奈德的副作用。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下:

一種從脫殼亞麻籽中提取活性蛋白的方法,包括以下步驟:

1)原料選擇:選用新鮮?無霉變的帶殼亞麻籽;

2)粒徑篩分:根據(jù)粒徑大小對帶殼亞麻籽進(jìn)行分級篩選預(yù)處理,以便后續(xù)脫殼步驟更均勻和高效;

3)清洗去雜:對篩選后的某一分級的帶殼亞麻籽進(jìn)行清洗;

4)微波烘干;使用分段微波烘干,使得帶殼亞麻籽處于適合脫殼狀態(tài);

5)脫殼處理:使用脫殼機進(jìn)行撞擊脫殼;

6)分離脫殼亞麻籽:依據(jù)脫殼亞麻籽的粒徑和亞麻籽殼的粒徑的差別,調(diào)節(jié)篩網(wǎng)篩孔大小,盡量分離得到較純的脫殼亞麻籽;

7)色選:使用色選機,將脫殼亞麻籽中的雜質(zhì)和不良品篩除,得到亞麻籽原料;

8)預(yù)處理:將亞麻籽原料進(jìn)行清洗,并干燥;

9)冷榨除油:將預(yù)處理之后的亞麻籽原料進(jìn)行冷榨,分離亞麻籽油和亞麻籽餅;

10)超臨界萃取除油:對亞麻籽餅進(jìn)行干燥,并進(jìn)一步粉碎,過100200目篩,得到亞麻籽粉,將亞麻籽粉加入超臨界萃取裝置中使用超臨界流體進(jìn)行萃取其中的油脂成分,得到除油后的亞麻籽粉;

11)酶解去雜:將亞麻籽粉溶于水中,加入纖維素酶?果膠酶和淀粉酶進(jìn)行酶解,超聲酶解,得到酶解液;

12)離心:1500030000g離心,取得沉淀;

13)重溶:將沉淀干燥后,再次溶解在去離子水中,使用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH4.25.5之間,2000030000g離心收集沉淀;

14)純化:將沉淀重溶,使用分子篩,截取其中分子量5070kD分子量的蛋白溶液;

15)凍干:將步驟14)得到的特定分子量范圍的蛋白溶液濃縮后凍干,得到活性蛋白。

進(jìn)一步的，上述一種從脫殼亞麻籽中提取活性蛋白的方法，所述步驟4)微波烘干，包括以下步驟：

第一階段：控制微波功率，使得溫度4555℃,保持510min;

第二階段:控制微波功率,使得溫度5565℃,保持36min;

第三階段:控制微波功率,使得溫度8090℃,保持25min;

第四階段：循環(huán)第一到第三階段2到3次，完成烘干步驟。

進(jìn)一步的，上述一種從脫殼亞麻籽中提取活性蛋白的方法，所述步驟8)預(yù)處理中，干燥使得亞麻籽原料的含水率在1018%之間。

進(jìn)一步的，上述一種從脫殼亞麻籽中提取活性蛋白的方法，所述步驟10)超臨界萃取除油中，所述干燥使得亞麻籽餅含水率在69%之間。

進(jìn)一步的，上述一種從脫殼亞麻籽中提取活性蛋白的方法，所述步驟10)超臨界萃取除油中，使用超聲波萃取裝置SFT110XW，使用二氧化碳為超臨界流體，設(shè)定萃取溫度3236℃、萃取壓力3040Mpa；完成萃取后，逐漸降低系統(tǒng)內(nèi)的壓力，得到除油后的亞麻籽粉。

進(jìn)一步的，上述一種從脫殼亞麻籽中提取活性蛋白的方法，所述11)酶解去雜中，按1g亞麻籽粉溶于1020mL水中的比例投料，并使得纖維素酶的濃度為100200U/mL?果膠酶150250U/mL和淀粉酶200400U/mL,酶解溫度為3842℃,酶解時同步進(jìn)行超聲,超聲功率100W/L,超聲頻率2540kHz。

進(jìn)一步的，上述一種從脫殼亞麻籽中提取活性蛋白的方法，所述步驟14)純化中，所述的分子篩的型號為SephadexG75,上樣的粗蛋白濃度為0.10.2g/mL，流動相為PBS緩沖液。

進(jìn)一步的，上述一種從脫殼亞麻籽中提取活性蛋白的方法，所述步驟15)凍干中，凍干程序如下：

a預(yù)凍：物料攤鋪開進(jìn)行預(yù)凍，攤鋪厚度在24cm,在常壓下進(jìn)行快速預(yù)凍,預(yù)凍時間6080min,預(yù)凍溫度35~55℃；

b冷凍干燥：凍干程序如下：

A:55~65℃,壓強550750Pa,凍干4575min;

B:65~75℃,壓強120220Pa,凍干100140min;

C:75~85℃,壓強70120Pa,凍干1020min；

D:恢復(fù)到常溫常壓,干燥至含水量低于5%,得到活性蛋白。

本發(fā)明還公開了一種活性蛋白，由上述的方法制備得到。

本發(fā)明還公開了活性蛋白在制備抗過敏噴霧中的用途，所述抗過敏噴霧中含有布地奈德和活性蛋白，所述布地奈德濃度為0.32mg/mL,所述活性蛋白濃度為0.10.4mg/mL。

相比現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有如下有益效果：

1.原料選擇與預(yù)處理優(yōu)化：通過選用新鮮、無霉變的帶殼亞麻籽，并進(jìn)行粒徑篩分和清洗去雜，確保了原料的優(yōu)質(zhì)性和后續(xù)處理的均勻性。

2.微波烘干技術(shù)：采用分段微波烘干方法，有效控制了溫度和時間，使得帶殼亞麻籽達(dá)到適合脫殼的狀態(tài)，提高了脫殼效率和成品質(zhì)量。

3.高效脫殼與分離：使用脫殼機進(jìn)行撞擊脫殼，并通過調(diào)節(jié)篩網(wǎng)篩孔大小實現(xiàn)較純的脫殼亞麻籽分離，減少了雜質(zhì)對最終產(chǎn)品的影響。

4.色選與深度清潔：利用色選機進(jìn)一步去除雜質(zhì)和不良品，再通過預(yù)處理中的清洗和干燥步驟，確保亞麻籽原料的潔凈度和適宜的含水率，為后續(xù)提取過程打下良好基礎(chǔ)。

5.綜合除油技術(shù)：結(jié)合冷榨和超臨界萃取兩種方法，有效去除了亞麻籽中的油脂成分，特別是超臨界萃取技術(shù)的應(yīng)用，能夠在較低溫度下高效提取油脂，保護(hù)了活性蛋白的生物活性和穩(wěn)定性。

6.酶解去雜與純化：通過多酶協(xié)同作用進(jìn)行酶解處理，有效去除了亞麻籽粉中的纖維素、果膠和淀粉等雜質(zhì)，再通過分子篩純化得到特定分子量范圍的活性蛋白溶液，提高了產(chǎn)品的純度。

7.凍干工藝優(yōu)化：采用優(yōu)化的凍干程序，確保了活性蛋白在低溫低壓下快速干燥至含水量低于5％，既保留了蛋白的生物活性又延長了其保質(zhì)期。

8.高價值應(yīng)用潛力：制備得到的活性蛋白具有多種潛在應(yīng)用價值，特別是在抗過敏噴霧中的應(yīng)用，通過與布地奈德等藥物的聯(lián)合使用，能夠發(fā)揮更好的治療效果，為相關(guān)藥物的開發(fā)提供了新的思路和方法。

 

附圖說明

圖1為本發(fā)明的工藝流程圖；

  

圖1

圖2為對比例1和實施例13的亞麻籽脫殼率的比較；

亞麻籽脫殼率(%)

  

圖2

 

 

 

 

圖3為最終獲得的活性蛋白的量(g)的比較；

活性蛋白質(zhì)量(g)

  

圖3

圖4為過敏性鼻炎改善得分情況。

過敏性鼻炎改善得分

  

圖4

 

具體實施方式

如圖1所示，一種從脫殼亞麻籽中提取活性蛋白的方法，包括以下步驟：

1)原料選擇:選用新鮮?無霉變的帶殼亞麻籽;

2)粒徑篩分:根據(jù)粒徑大小對帶殼亞麻籽進(jìn)行分級篩選預(yù)處理,以便后續(xù)脫殼步驟更均勻和高效;

3)清洗去雜:對篩選后的某一分級的帶殼亞麻籽進(jìn)行清洗;

4)微波烘干;使用分段微波烘干,使得帶殼亞麻籽處于適合脫殼狀態(tài);

5)脫殼處理:使用脫殼機進(jìn)行撞擊脫殼;

6)分離脫殼亞麻籽:依據(jù)脫殼亞麻籽的粒徑和亞麻籽殼的粒徑的差別,調(diào)節(jié)篩網(wǎng)篩孔大小,盡量分離得到較純的脫殼亞麻籽;

7)色選:使用色選機,將脫殼亞麻籽中的雜質(zhì)和不良品篩除,得到亞麻籽原料;

8)預(yù)處理:將亞麻籽原料進(jìn)行清洗,并干燥;

9)冷榨除油:將預(yù)處理之后的亞麻籽原料進(jìn)行冷榨,分離亞麻籽油和亞麻籽餅;

10)超臨界萃取除油:對亞麻籽餅進(jìn)行干燥,并進(jìn)一步粉碎,過100200目篩,得到亞麻籽粉,將亞麻籽粉加入超臨界萃取裝置中使用超臨界流體進(jìn)行萃取其中的油脂成分,得到除油后的亞麻籽粉;

11)酶解去雜:將亞麻籽粉溶于水中,加入纖維素酶?果膠酶和淀粉酶進(jìn)行酶解,超聲酶解,得到酶解液;

12)離心:1500030000g離心,取得沉淀;

13)重溶:將沉淀干燥后,再次溶解在去離子水中,使用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH4.25.5之間,2000030000g離心收集沉淀;

14)純化:將沉淀重溶,使用分子篩,截取其中分子量5070kD分子量的蛋白溶液;

15)凍干:將步驟14)得到的特定分子量范圍的蛋白溶液濃縮后凍干,得到活性蛋白?

所述步驟4)微波烘干，包括以下步驟：

第一階段:控制微波功率,使得溫度4555℃,保持510min;

第二階段:控制微波功率,使得溫度5565℃,保持36min;

第三階段:控制微波功率,使得溫度8090℃,保持25min;

第四階段:循環(huán)第一到第三階段2到3次,完成烘干步驟。

所述步驟8)預(yù)處理中，干燥使得亞麻籽原料的含水率在1018%之間；

所述步驟10)超臨界萃取除油中，所述干燥使得亞麻籽餅含水率在69%之間；

所述步驟10)超臨界萃取除油中，使用超聲波萃取裝置SFT110XW，使用二氧化碳為超臨界流體，設(shè)定萃取溫度3236℃?萃取壓力3040Mpa；完成萃取后，逐漸降低系統(tǒng)內(nèi)的壓力，得到除油后的亞麻籽粉；

所述11)酶解去雜中，按1g亞麻籽粉溶于1020mL水中的比例投料，并使得纖維素酶的濃度為100200U/mL?果膠酶150250U/mL和淀粉酶200400U/mL,酶解溫度為3842℃，酶解時同步進(jìn)行超聲，超聲功率100W/L,超聲頻率2540kHz；

所述步驟14)純化中，所述的分子篩的型號為SephadexG75，上樣的粗蛋白濃度為0.10.2g/mL,流動相為PBS緩沖液；

所述步驟15)凍干中，凍干程序如下：

a預(yù)凍：物料攤鋪開進(jìn)行預(yù)凍，攤鋪厚度在24cm,在常壓下進(jìn)行快速預(yù)凍,預(yù)凍時間6080min,預(yù)凍溫度35~55℃；

b冷凍干燥：凍干程序如下：

A:55~65℃,壓強550750Pa,凍干4575min；

B:65~75℃,壓強120220Pa,凍干100140min；

C:75~85℃,壓強70120Pa,凍干1020min；

D：恢復(fù)到常溫常壓，干燥至含水量低于5％，得到活性蛋白。

下面對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其它實施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

實施例1

一種從脫殼亞麻籽中提取活性蛋白的方法，包括以下步驟：

1)原料選擇:選用新鮮、無霉變的帶殼亞麻籽；

2)粒徑篩分:根據(jù)粒徑大小對帶殼亞麻籽進(jìn)行分級篩選預(yù)處理，以便后續(xù)脫殼步驟更均勻和高效；

3)清洗去雜:對篩選后的某一分級的帶殼亞麻籽進(jìn)行清洗；

4)微波烘干;使用分段微波烘干，使得帶殼亞麻籽處于適合脫殼狀態(tài)；

5)脫殼處理:使用脫殼機進(jìn)行撞擊脫殼；

6)分離脫殼亞麻籽:依據(jù)脫殼亞麻籽的粒徑和亞麻籽殼的粒徑的差別，調(diào)節(jié)篩網(wǎng)篩孔大小，盡量分離得到較純的脫殼亞麻籽；

7)色選:使用色選機，將脫殼亞麻籽中的雜質(zhì)和不良品篩除，得到亞麻籽原料；

8)預(yù)處理:將亞麻籽原料進(jìn)行清洗，并干燥；

9)冷榨除油:將預(yù)處理之后的亞麻籽原料進(jìn)行冷榨，分離亞麻籽油和亞麻籽餅；

10)超臨界萃取除油：對亞麻籽餅進(jìn)行干燥，并進(jìn)一步粉碎，過100200目篩，得到亞麻籽粉，將亞麻籽粉加入超臨界萃取裝置中使用超臨界流體進(jìn)行萃取其中的油脂成分，得到除油后的亞麻籽粉；

11)酶解去雜:將亞麻籽粉溶于水中，加入纖維素酶、果膠酶和淀粉酶進(jìn)行酶解，超聲酶解，得到酶解液；

12)離心:15000g離心，取得沉淀；

13)重溶:將沉淀干燥后，再次溶解在去離子水中，使用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH4.2,20000g離心收集沉淀；

14)純化:將沉淀重溶，使用分子篩，截取其中分子量5070kD分子量的蛋白溶液；

15)凍干:將步驟14)得到的特定分子量范圍的蛋白溶液濃縮后凍干，得到活性蛋白。

所述步驟4)微波烘干,包括以下步驟:

第一階段:控制微波功率,使得溫度4555℃,保持5min;

第二階段:控制微波功率,使得溫度5565℃,保持3min;

第三階段:控制微波功率,使得溫度8090℃,保持2min;

第四階段:循環(huán)第一到第三階段2次,完成烘干步驟?

所述步驟8)預(yù)處理中,干燥使得亞麻籽原料的含水率在1018%之間;

所述步驟10)超臨界萃取除油中,所述干燥使得亞麻籽餅含水率在69%之間;

所述步驟10)超臨界萃取除油中,使用超聲波萃取裝置SFT110XW,使用二氧化碳為超臨界流體,設(shè)定萃取溫度32℃?萃取壓力30Mpa;完成萃取后,逐漸降低系統(tǒng)內(nèi)的壓力,得到除油后的亞麻籽粉;

所述11)酶解去雜中,按1g亞麻籽粉溶于10mL水中的比例投料,并使得纖維素酶的濃度為100U/mL?果膠酶150U/mL和淀粉酶200U/mL,酶解溫度為38℃,酶解時同步進(jìn)行超聲,超聲功率100W/L,超聲頻率25kHz;

所述步驟14)純化中,所述的分子篩的型號為SephadexG75,上樣的粗蛋白濃度為0.1g/mL,流動相為PBS緩沖液;

所述步驟15)凍干中,凍干程序如下:

a預(yù)凍:物料攤鋪開進(jìn)行預(yù)凍,攤鋪厚度在2cm,在常壓下進(jìn)行快速預(yù)凍,預(yù)凍時間60min,預(yù)凍溫度35~55℃;

b冷凍干燥:凍干程序如下:

A:55~65℃,壓強550750Pa,凍干45min;

B:65~75℃,壓強120220Pa,凍干100min;

C:75~85℃,壓強70120Pa,凍干10min;

D:恢復(fù)到常溫常壓,干燥至含水量低于5%,得到活性蛋白。

實施例2

一種從脫殼亞麻籽中提取活性蛋白的方法,包括以下步驟:

1)原料選擇:選用新鮮?無霉變的帶殼亞麻籽;

2)粒徑篩分:根據(jù)粒徑大小對帶殼亞麻籽進(jìn)行分級篩選預(yù)處理,以便后續(xù)脫殼步驟更均勻和高效;

3)清洗去雜:對篩選后的某一分級的帶殼亞麻籽進(jìn)行清洗;

4)微波烘干;使用分段微波烘干,使得帶殼亞麻籽處于適合脫殼狀態(tài);

5)脫殼處理:使用脫殼機進(jìn)行撞擊脫殼;

6)分離脫殼亞麻籽:依據(jù)脫殼亞麻籽的粒徑和亞麻籽殼的粒徑的差別,調(diào)節(jié)篩網(wǎng)篩孔大小,盡量分離得到較純的脫殼亞麻籽;

7)色選:使用色選機,將脫殼亞麻籽中的雜質(zhì)和不良品篩除,得到亞麻籽原料;

8)預(yù)處理:將亞麻籽原料進(jìn)行清洗,并干燥;

9)冷榨除油:將預(yù)處理之后的亞麻籽原料進(jìn)行冷榨,分離亞麻籽油和亞麻籽餅;

10)超臨界萃取除油:對亞麻籽餅進(jìn)行干燥,并進(jìn)一步粉碎,過100200目篩,得到亞麻籽粉,將亞麻籽粉加入超臨界萃取裝置中使用超臨界流體進(jìn)行萃取其中的油脂成分,得到除油后的亞麻籽粉;

11)酶解去雜:將亞麻籽粉溶于水中,加入纖維素酶?果膠酶和淀粉酶進(jìn)行酶解,超聲酶解,得到酶解液;

12)離心:25000g離心,取得沉淀;

13)重溶:將沉淀干燥后,再次溶解在去離子水中,使用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH4.8,25000g離心收集沉淀;

14)純化:將沉淀重溶,使用分子篩,截取其中分子量5070kD分子量的蛋白溶液;

15)凍干:將步驟14)得到的特定分子量范圍的蛋白溶液濃縮后凍干,得到活性蛋白。

所述步驟4)微波烘干,包括以下步驟:

第一階段:控制微波功率,使得溫度4555℃,保持8min;

第二階段:控制微波功率,使得溫度5565℃,保持4min;

第三階段:控制微波功率,使得溫度8090℃,保持3min;

第四階段:循環(huán)第一到第三階段2次,完成烘干步驟?

所述步驟8)預(yù)處理中,干燥使得亞麻籽原料的含水率在1018%之間;

所述步驟10)超臨界萃取除油中,所述干燥使得亞麻籽餅含水率在69%之間;

所述步驟10)超臨界萃取除油中,使用超聲波萃取裝置SFT110XW,使用二氧化碳為超臨界流體,設(shè)定萃取溫度34℃?萃取壓力35Mpa;完成萃取后,逐漸降低系統(tǒng)內(nèi)的壓力,得到除油后的亞麻籽粉;

所述11)酶解去雜中,按1g亞麻籽粉溶于15mL水中的比例投料,并使得纖維素酶的濃度為150U/mL?果膠酶200U/mL和淀粉酶300U/mL,酶解溫度為40℃,酶解時同步進(jìn)行超聲,超聲功率100W/L,超聲頻率30kHz;

所述步驟14)純化中,所述的分子篩的型號為SephadexG75,上樣的粗蛋白濃度為0.15g/mL,流動相為PBS緩沖液;

所述步驟15)凍干中,凍干程序如下:

a預(yù)凍:物料攤鋪開進(jìn)行預(yù)凍,攤鋪厚度在3cm,在常壓下進(jìn)行快速預(yù)凍,預(yù)凍時間70min,預(yù)凍溫度35~55℃;

b冷凍干燥:凍干程序如下:

A:55~65℃,壓強550750Pa,凍干60min;

B:65~75℃,壓強120220Pa,凍干120min;

C:75~85℃,壓強70120Pa,凍干15min;

D:恢復(fù)到常溫常壓,干燥至含水量低于5%,得到活性蛋白。

實施例3

一種從脫殼亞麻籽中提取活性蛋白的方法,其特征在于,包括以下步驟:

1)原料選擇:選用新鮮?無霉變的帶殼亞麻籽;

2)粒徑篩分:根據(jù)粒徑大小對帶殼亞麻籽進(jìn)行分級篩選預(yù)處理,以便后續(xù)脫殼步驟更均勻和高效;

3)清洗去雜:對篩選后的某一分級的帶殼亞麻籽進(jìn)行清洗;

4)微波烘干;使用分段微波烘干,使得帶殼亞麻籽處于適合脫殼狀態(tài);

5)脫殼處理:使用脫殼機進(jìn)行撞擊脫殼;

6)分離脫殼亞麻籽:依據(jù)脫殼亞麻籽的粒徑和亞麻籽殼的粒徑的差別,調(diào)節(jié)篩網(wǎng)篩孔大小,盡量分離得到較純的脫殼亞麻籽;

7)色選:使用色選機,將脫殼亞麻籽中的雜質(zhì)和不良品篩除,得到亞麻籽原料;

8)預(yù)處理:將亞麻籽原料進(jìn)行清洗,并干燥;

9)冷榨除油:將預(yù)處理之后的亞麻籽原料進(jìn)行冷榨,分離亞麻籽油和亞麻籽餅;

10)超臨界萃取除油:對亞麻籽餅進(jìn)行干燥,并進(jìn)一步粉碎,過100200目篩,得到亞麻籽粉,將亞麻籽粉加入超臨界萃取裝置中使用超臨界流體進(jìn)行萃取其中的油脂成分,得到除油后的亞麻籽粉;

11)酶解去雜:將亞麻籽粉溶于水中,加入纖維素酶?果膠酶和淀粉酶進(jìn)行酶解,超聲酶解,得到酶解液;

12)離心:30000g離心,取得沉淀;

13)重溶:將沉淀干燥后,再次溶解在去離子水中,使用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH5.5,30000g離心收集沉淀;

14)純化:將沉淀重溶,使用分子篩,截取其中分子量5070kD分子量的蛋白溶液;

15)凍干:將步驟14)得到的特定分子量范圍的蛋白溶液濃縮后凍干,得到活性蛋白。

所述步驟4)微波烘干,包括以下步驟:

第一階段:控制微波功率,使得溫度4555℃,保持10min;

第二階段:控制微波功率,使得溫度5565℃,保持6min;

第三階段:控制微波功率,使得溫度8090℃,保持5min;

第四階段:循環(huán)第一到第三階段2次,完成烘干步驟。

所述步驟8)預(yù)處理中,干燥使得亞麻籽原料的含水率在1018%之間;

所述步驟10)超臨界萃取除油中,所述干燥使得亞麻籽餅含水率在69%之間;

所述步驟10)超臨界萃取除油中,使用超聲波萃取裝置SFT110XW,使用二氧化碳為超臨界流體,設(shè)定萃取溫度36℃?萃取壓力40Mpa;完成萃取后,逐漸降低系統(tǒng)內(nèi)的壓力,得到除油后的亞麻籽粉;

所述11)酶解去雜中,按1g亞麻籽粉溶于20mL水中的比例投料,并使得纖維素酶的濃度為200U/mL?果膠酶250U/mL和淀粉酶400U/mL,酶解溫度為42℃,酶解時同步進(jìn)行超聲,超聲功率100W/L,超聲頻率40kHz;

所述步驟14)純化中,所述的分子篩的型號為SephadexG75,上樣的粗蛋白濃度為0.2g/mL,流動相為PBS緩沖液;

所述步驟15)凍干中,凍干程序如下:

a預(yù)凍:物料攤鋪開進(jìn)行預(yù)凍,攤鋪厚度在24cm,在常壓下進(jìn)行快速預(yù)凍,預(yù)凍時間80min,預(yù)凍溫度35~55℃;

b冷凍干燥:凍干程序如下:

A:55~65℃,壓強550750Pa,凍干75min;

B:65~75℃,壓強120220Pa,凍干140min;

C:75~85℃,壓強70120Pa,凍干20min;

D:恢復(fù)到常溫常壓,干燥至含水量低于5%,得到活性蛋白。

對比例1

所述步驟4)微波烘干,包括以下步驟:

控制微波功率,使得溫度5565℃,保持60min;

其余同實施例2。

對比例2

不包括10)超臨界萃取除油,其余同實施例2。

對比例3

不包括11)酶解去雜,其余同實施例2

測試?yán)?/font>1

比較對比例1和實施例13的步驟(5)之后的亞麻籽脫殼率。

所述脫殼率是指經(jīng)過脫殼處理后,成功從亞麻籽中分離出的外殼部分占原始亞麻籽總質(zhì)量的百分比,即脫殼率=(殼的質(zhì)量/原始亞麻籽的總質(zhì)量)×100%。

結(jié)果見表1和圖2。

表1 亞麻籽脫殼率(%)

  

從表1數(shù)據(jù)可知,使用分段式的微波干燥處理,可以大幅增加亞麻籽的脫殼率,為后續(xù)的活性蛋白的提取提高效率。

測試?yán)?/font>2

比較實施例13以及對比例12最終獲得的活性蛋白的量,起始的帶殼亞麻籽質(zhì)量均為100g。

結(jié)果如表2和圖3所示。

表2 最終獲得的活性蛋白的量(g)

  

從表2結(jié)果來看,本發(fā)明所述的方法對上述活性蛋白的提取均較好,加入10)超臨界萃取除油和11)酶解去雜可進(jìn)一步提高活性蛋白的得率。

測試?yán)?/font>3

將實施例2得到的活性蛋白,加入不同濃度布地奈德鼻噴霧劑中,進(jìn)行測試,配方表見表3

表3 配方表

  

依據(jù)上述表3的配方,對患有過敏性鼻炎的志愿者進(jìn)行治療,隨機分成7組,每組30人,每天噴5噴,每噴約20微升,連續(xù)7天,填寫7天之后你鼻炎的緩解情況,5分為很滿意,4分為滿意,3分為有改善,2分為略有改善,1分為沒有改善,0分為更嚴(yán)重,取平均值。結(jié)果見表4和圖4所示。

表4 過敏性鼻炎改善得分表

  

從以上配方17的結(jié)果來看,在布地奈德0.32mg/mL以上,加入0.1或者0.4mg/mL活性蛋白,均能較大幅度提高其治療效果,特別是當(dāng)布地奈德0.32mg/mL加入0.1mg/mL活性蛋白是,其治療效果與單獨使用市面上常見的1.28mg/mL布地奈德相當(dāng)。

從以上測試結(jié)果可以看出,上述的活性蛋白具有提高低濃度布地奈德的抗過敏效果,作為一種活性添加劑,可以提高布地奈德的治療效果,降低布的奈德含量,降低攝入量,理論上可以降低布地奈德的副作用。

以上為本發(fā)明的有限的幾種優(yōu)選實施方式,其描述較為具體和詳細(xì),但并不能因此而理解為對本發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是,對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說,在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下,還可以做出若干變形和改進(jìn),這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。

 

文章摘自國家發(fā)明專利,一種從脫殼亞麻籽中提取活性蛋白的方法,陳建國,趙曉萍,韋雪,任亮亮,孟云,董馨,史敏,陳宇航,申請?zhí)?202411084311.0,申請日,2024.08.08。