摘 要:一種生物酶法選擇性提純制備亞麻酸的方法，屬于生物化工和酶催化領(lǐng)域，具體涉及以一種天然來源的混合脂肪酸為基礎(chǔ)通過水合酶的選擇性催化提純制備亞麻酸的方法。其中，所述底物包括紫蘇籽油，亞麻籽油，深海魚油，山核桃油等富含亞麻酸的天然油的任一種或多種。將脂肪酸水合酶和混合脂肪酸進行水合反應(yīng)，選擇合適的具有催化速度差異的水合酶，并根據(jù)催化選擇性與速度的差異，實現(xiàn)對混合物中油酸、亞油酸的羥基化，而對亞麻酸不反應(yīng)，根據(jù)反應(yīng)前后基團的變化導(dǎo)致物性的差異，極容易將亞麻酸與羥基脂肪酸進行有效的分離以得到高純度的亞麻酸。本發(fā)明反應(yīng)條件溫和，污染小，過程簡易性，收率高，處理量大，副產(chǎn)物羥基脂肪酸具有經(jīng)濟價值的優(yōu)勢。
權(quán)利要求書
1.一種使用生物酶法選擇性提純制備亞麻酸的方法，其特征在于，包括以下步驟：S1：以可再生資源混合脂肪酸為提純底物，去除其中飽和脂肪酸；S2：使用特定的水合酶作為催化劑，采用緩沖液作為溶劑，配置反應(yīng)體系如下：步驟S1去除飽和脂肪酸的混合脂肪酸、特定的催化劑、表面活性劑，恒溫反應(yīng)器中進行水合反應(yīng)；S3：反應(yīng)結(jié)束得羥基脂肪酸和亞麻酸混合物，進行硅膠柱層析后即得目標(biāo)產(chǎn)物亞麻酸和副產(chǎn)物羥基脂肪酸。
2.按照權(quán)利要求1所述的一種使用生物酶法選擇性提純制備亞麻酸的方法，其特征在于，S1中所述的混合脂肪酸采用各種來源的脂肪酸紫蘇籽油、亞麻籽油深海魚油，山核桃油等富含亞麻酸的天然油的任一種或多種。
3.按照權(quán)利要求1所述的一種使用生物酶法選擇性提純制備亞麻酸的方法，其特征在于，所述方法去除其中飽和脂肪酸，如采用通過尿素包合法進行處理以除去飽和脂肪酸。
4.按照權(quán)利要求1所述的一種使用生物酶法選擇性提純制備亞麻酸的方法，其特征在于，S2中特定的水合酶選自脂肪酸水合酶FA HY2、脂肪酸水合酶LfOAH、脂肪酸水合酶BbMCRA2中的一種；優(yōu)選使用短雙歧桿菌來源的脂肪酸水合酶BbMCRA2作為催化劑。
5.按照權(quán)利要求1所述的一種使用生物酶法選擇性提純制備亞麻酸的方法，其特征在于，S2中所述水合催化劑的用量為所述去除飽和脂肪酸的混合脂肪酸質(zhì)量的1%～100％，優(yōu)選10％。
6.按照權(quán)利要求1所述的一種使用生物酶法選擇性提純制備亞麻酸的方法，其特征在于，S2中反應(yīng)體系在pH為5～9的緩沖液中進行，所述緩沖液為PBS,Tris-HCl，PB，磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液；優(yōu)選的，所述緩沖液為Tris-HCl。
7.按照權(quán)利要求1所述的一種使用生物酶法選擇性提純制備亞麻酸的方法，其特征在于，S2中催化轉(zhuǎn)化反應(yīng)的溫度為10～50℃，優(yōu)選20～30℃；S2中反應(yīng)時間為1～30h小時優(yōu)選4-10h。
8.按照權(quán)利要求1所述的一種使用生物酶法選擇性提純制備亞麻酸的方法，其特征在于，所述反應(yīng)在常壓條件下進行；反應(yīng)在金屬浴、攪拌、填充床、搖床條件下進行，轉(zhuǎn)速為100rpm～1200rpm；優(yōu)選的，反應(yīng)時采用恒溫金屬浴，轉(zhuǎn)速為200rpm-800rpm。
9.按照權(quán)利要求1所述的一種使用生物酶法選擇性提純制備亞麻酸的方法，其特征在于，S3中酶促水合催化后，根據(jù)極性差異對羥基脂肪酸和亞麻酸進使用柱層析法對二者進行分離；優(yōu)選地，體積比20：1的石油醚和乙醇或體積比為40:1的二氯甲烷：無水甲醇作為分離流動相。
10.按照權(quán)利要求1所述的一種使用生物酶法選擇性提純制備亞麻酸的方法，其特征在于，還包括S4：在S3柱層析后得到的亞麻酸含量較高的物相再次進行步驟S2-S3的操作，進一步純化
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于生物化工和酶催化技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種酶法選擇性催化制備高純度亞麻酸的方法。
技術(shù)背景
α-亞麻酸(α Linolenicacid,ALA)作為一種重要的OMEGA-3多不飽和脂肪酸(Polyunsaturatedfattyacid，PUFA)，是n-3多不飽和脂肪酸中唯一的必需脂肪酸，除了在食品、藥品和保健品領(lǐng)域的應(yīng)用外，它還廣泛應(yīng)用于化妝品、生物燃料、油漆和涂料以及紡織工業(yè)等行業(yè)。國際醫(yī)學(xué)和營養(yǎng)學(xué)界的大量基礎(chǔ)研究、流行病學(xué)調(diào)查、動物試驗及臨床觀察表明，α-亞麻酸具有以下多方面的生理功效，即預(yù)防心腦血管病、抑制癌癥的發(fā)生和轉(zhuǎn)移、抑制過敏反應(yīng)和抗炎作用、抑制衰老、增強智力和保護視力等(張軍林，廖貴芹，楊陽主編；方中明，阮景軍，楊陽，張軍林，彭玲，廖貴芹，魏倩，矍金旺編者,簡明生物化學(xué),華中師范大學(xué)出版社,2014.06,36 37)。90年代以來世界許多發(fā)達(dá)國家如美國、英國、法國、日本等國家都立法規(guī)定：在指定的食品中必須添加α-亞麻酸，方可進行銷售。我國人群膳食中普遍缺乏α-亞麻酸，日攝入量不足世界衛(wèi)生組織推薦的一半，我國醫(yī)學(xué)界與營養(yǎng)學(xué)界專家紛紛呼吁國家立法專項補充α-亞麻酸。ALA的純度直接影響其在這些領(lǐng)域的有效性和結(jié)果。例如，達(dá)到一定水平的不飽和脂肪酸純度對于滿足治療某些疾病的要求至關(guān)重要，其中藥品的純度直接關(guān)系到其有效性和安全性。此外，高純度不飽和脂肪酸在確保涂料和潤滑劑的質(zhì)量和穩(wěn)定性方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。如今，綠色天然高純度ALA面臨著更高的需求。目前，已經(jīng)鑒定出多種含油量大于25％、ALA含量大于50％的植物，如亞麻、紫蘇和鼠尾草等。他們將是純化ALA的理想原料。因此，以這種工業(yè)作物為基礎(chǔ)，開發(fā)一種高效、環(huán)保的ALA純化方法具有重要意義。目前，ALA的主要純化方法有尿素絡(luò)合(Lee et al.，2016， High-yield methods for purification of α-linolenic acid from Perilla frutescens var .japonica oil .Appl .Biol .Chem .)、銀鐵絡(luò)合(Ge et al .，2017， Separation and purification ofα-linolenic acid from Phyllanthus em blica L .seed oil by silver iron complexation .)、分子蒸餾 (Che n et al .，2013， Purification ofα-linolenic acid by molecular distillation from Linseed oil .Sci .Technol .Food Ind .)、超臨界萃取(Pan et al .，2012，Supercritical carbon dioxide extraction of the oak silkworm(Antheraea pernyi)pupal oil:process optimization and composition determination .Int .J .Mol .Sci .)、低溫結(jié)晶和柱層析(Gu et al .，2009，Concentration ofα-linoleic acid of perilla oil by gradient cooling urea inclusion .Agric .Sci .China)。其中，尿素絡(luò)合似乎特別適合于大規(guī)模 ω - 3PUFA富集，因為它能夠使用簡單的設(shè)備、經(jīng)濟高效的溶劑和溫和的條件(室溫)處理大量的材料。Lee et al . (Lee et al .，2016，High-yield methods for purification ofα-linolenic acid from Perilla frutescens var.japonica oil .Appl .Biol .Chem .)使用尿素絡(luò)合在24小時內(nèi)從紫蘇精油中獲得了81.75％的ALA純度。古海波等人通過梯度冷卻素絡(luò)合優(yōu)化了紫蘇油中ALA的純化條件，純度為91.5％ (Gu et al .，2009，Concentration of α-linoleic acid of perilla oil by gradient cooling urea inclusion.Agric.Sci.China)。然而，由于在分離具有相似C＝C鍵數(shù)的脂肪酸時面臨挑戰(zhàn)， 這種方法無法輕易獲得高純度的ALA。多次反應(yīng)導(dǎo)致大量的產(chǎn)物損失和產(chǎn)率降低。盡管Wang 等人(Wang et al .，2022，Urea complexation combined with rapid preparative reversed-phase liquid chromatography to separateα-linolenic acid from perilla seed oil:Purity,yield ,and oxidation stability .Ind .Crops Prod .)通過尿素絡(luò)合結(jié)合快速制備反相液相色譜成功地獲得了非常高的ALA純度(99.20％)，但可擴展性仍然存在局限性。雖然尿素絡(luò)合在純化ALA方面存在局限性，但它在分離飽和和不飽和脂肪酸(SFAs 和UFAs)方面表現(xiàn)出優(yōu)異的性能，并得到了廣泛的工業(yè)應(yīng)用(Liu et al .，2023，Efficient rapid fractionation of fatty acid methyl esters (FAMEs)through evaporative urea inclusion.Chemical Engineering Journal)。不同不飽和脂肪酸分離的關(guān)鍵和難點在于其物理性質(zhì)相似，這使得該過程在工業(yè)上的產(chǎn)率較低，可擴展性較差。此外，一些方法的成本很高。在大多數(shù)情況下，單一分離方法很難達(dá)到純化要求。所以，如何將生物酶法與現(xiàn)有成熟技術(shù)相結(jié)合，開發(fā)一種綠色、可擴展、可工業(yè)化的新型ALA凈化方法是值得關(guān)注的問題。
脂肪酸水合酶是一類可以將水選擇性的加在不飽和脂肪酸C＝C雙鍵上的一類酶，種類眾多。雖然脂肪酸水合酶的催化性質(zhì)較為統(tǒng)一，但是依然存在一部分特殊的脂肪酸水合酶，它們對不同鏈長，不同飽和度的不飽和脂肪酸具有不同的催化特異性，根據(jù)此特異性，本發(fā)明選擇合適的水合酶并嚴(yán)格控制反應(yīng)條件如反應(yīng)時間，使其催化一些自然界的脂肪酸中的油酸和亞油酸生成羥基脂肪酸，同時維持對亞麻酸的低催化效率，能夠根據(jù)基團修飾導(dǎo)致的物理性質(zhì)變化有效地分離副產(chǎn)物羥基脂肪酸(HFA)和主產(chǎn)物亞麻酸(ALA)。此外，副產(chǎn)品
HFAs還可以用作合成樹脂、尼龍、聚氨酯、塑料、潤滑劑、生物聚合物和肥皂的起始材料(Mutlu和Meier,2010，Castor oil as a renewable resource for the chemical industry.Eur.J.Lipid Sci.Technol.)。
綜上，相較于傳統(tǒng)的工業(yè)方法，生物酶法提純亞麻酸具有反應(yīng)條件溫和，污染小，易放大，能耗低，過程簡單等明顯的優(yōu)勢。同時，基于生物酶法提純亞麻酸的工藝尚未報道。
有鑒于此，特提出本發(fā)明。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提出了一種酶法選擇性催化制備高純度亞麻酸的方法，本方法以天然來源廣泛的可再生資源不飽和脂肪酸(油酸，亞油酸和亞麻酸)為基礎(chǔ)，找到具有反應(yīng)速度差的水合酶，并且通過控制條件加大了反應(yīng)能力的差別，從而實現(xiàn)了根據(jù)脂肪酸水合酶的催化速度差異的亞麻酸純化，催化油酸和亞油酸生成羥基脂肪酸，同時保持對亞麻酸的低催化活性，并根據(jù)極性差異進行分離，克服傳統(tǒng)方法中的諸多缺陷，以一種溫和環(huán)保高效的方式 制備高純度的亞麻酸。
本發(fā)明包括以下步驟：基于尋找到的具有反應(yīng)速度差異的水合酶，根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)利用菌體發(fā)酵或者基因工程菌構(gòu)建水合酶，根據(jù)他們對不同脂肪酸的催化差異性，控制反應(yīng)條件如時間來實現(xiàn)理想的催化效果，之后根據(jù)物性差異(亞麻酸與羥基脂肪酸的極性)來分離主產(chǎn)物亞麻酸和副產(chǎn)物羥基脂肪酸。
一種生物酶法選擇性提純制備亞麻酸的方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1：以可再生資源混合脂肪酸為提純底物，去除其中飽和脂肪酸；
S2：使用特定的水合酶作為催化劑，采用緩沖液作為溶劑，配置反應(yīng)體系如下：步驟S1去除飽和脂肪酸的混合脂肪酸、特定的催化劑、表面活性劑，恒溫反應(yīng)器中進行水合反應(yīng)。
S3：反應(yīng)結(jié)束得羥基脂肪酸和脂肪酸(亞麻酸)混合物，進行硅膠柱層析后即得目 標(biāo)產(chǎn)物亞麻酸和副產(chǎn)物羥基脂肪酸。
其中，S1中所述的混合脂肪酸采用各種來源的脂肪酸紫蘇籽油、亞麻籽油深海魚 油，山核桃油等富含亞麻酸的天然油的任一種或多種。
可選的，所述方法去除其中飽和脂肪酸，如采用通過尿素包合法進行處理以除去飽和脂肪酸。
可選的，S2中還包括，對催化劑的選擇和催化條件的限定，基于不同催化劑對不同脂肪酸的催化差異性，應(yīng)選擇合適的反應(yīng)時間。
特定的水合酶選自脂肪酸水合酶FA-HY2、脂肪酸水合酶LfOAH、脂肪酸水合酶 BbMCRA2中的一種；優(yōu)選使用短雙歧桿菌來源的脂肪酸水合酶BbMCRA2作為催化劑。
優(yōu)選地，所述水合催化劑的用量為所述去除飽和脂肪酸的混合脂肪酸質(zhì)量的1‰~100％，優(yōu)選10％。催化劑可以提供更多的脂肪酸底物結(jié)合位點，利于反應(yīng)的進行，但是過多的催化劑會使體系粘稠度增加，不利于傳質(zhì)，同時也會增加成本。
在本發(fā)明實施方式中，反應(yīng)體系在pH為5～9的緩沖液中進行，所述緩沖液為PBS, Tris-HCl，PB，磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液；優(yōu)選的，所述緩沖液為 Tris-HCl。
催化轉(zhuǎn)化反應(yīng)的溫度為10～50℃ , 優(yōu)選20～30℃ , 水合反應(yīng)溫度過低會使反應(yīng)進行過慢，過高則會影響酶的活性，在優(yōu)選溫度范圍內(nèi)催化性的選擇性最好。
反應(yīng)時間為1～30h小時優(yōu)選4-10h。
所述反應(yīng)在常壓條件下進行；反應(yīng)在金屬浴、攪拌、填充床、搖床條件下進行，轉(zhuǎn)速為100rpm～1200rpm；優(yōu)選的，反應(yīng)時采用恒溫金屬浴，轉(zhuǎn)速為200rpm-800rpm。
S3中酶促水合催化后，根據(jù)極性差異對羥基脂肪酸和亞麻酸進使用柱層析法對二者進行分離；
優(yōu)選地，體積比20：1的石油醚和乙醇或體積比為40:1的二氯甲烷：無水甲醇作為分離流動相。
進一步還包括S4：在S3柱層析后得到的亞麻酸含量較高的物相再次進行步驟S2- S3的操作，進一步純化。
在本發(fā)明實施方式中，將分離后的產(chǎn)物(ALA)通過如上所述體系，再進行一次酶催化和極性分離法，該過程簡單且容易放大，無污染，通過催化-分離交替法多次分離，更進一步提高亞麻酸的純度。
有益效果
本發(fā)明針對現(xiàn)有的亞麻酸提純工藝中存在的處理當(dāng)量小，純度和收率低，過程中存在污染，副產(chǎn)物多的問題，提供了一種酶促水合純化亞麻酸的過程，以實現(xiàn)在溫和水性條件下對亞麻酸進行提純，創(chuàng)造性的使用生物酶的選擇性來分離不飽和脂肪酸，其具有過程無污染，操作簡便，能耗低，純度和收率高以及副產(chǎn)物羥基脂肪酸同樣具有經(jīng)濟價值(其廣泛應(yīng)用于樹脂、化妝品、潤滑油和涂料中的添加劑等的生產(chǎn)之中)的優(yōu)點。經(jīng)過兩次催化可使ALA的純度提升至94.71％，且收率維持在高收率85.34％，其純度和收率都優(yōu)于其它報道。同時，此方法的批次處理當(dāng)量相較于其他報道也更大，可用于實際工業(yè)生產(chǎn)。
本發(fā)明提出生物酶法提純亞麻酸的新方法，結(jié)合催化-分離交替法，經(jīng)過一次催化提純可將亞麻酸純度提升至79％以上，經(jīng)過兩次提純可將純度提升至93％以上。
附圖說明
為了更清楚地說明本發(fā)明具體實施方式或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對具體實施方式或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖是本發(fā)明的一些實施方式，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。
圖1所示，為亞麻酸拆分提純路徑圖。
圖2所示，為實施例4生物酶法提純前后亞麻酸氣相色譜圖。
具體實施方式
為使本發(fā)明實施例的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點更加清楚，下面將結(jié)合本發(fā)明實施例中的附圖，對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例只是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。
需要說明的是，本發(fā)明所述的混合脂肪酸可以采用紫蘇，亞麻，大豆等各種來源的脂肪酸。以下實施例中涉及的催化劑可以是脂肪酸水合酶中的任意一種。
實施例1
根據(jù)本發(fā)明提供的亞麻酸提純方法，使用一般尿素包合法進行飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸的分離，將不飽和脂肪酸進行酶法催化，之后進行亞麻酸和羥基脂肪酸的分離。具體步驟如下:
S1：以紫蘇籽油為提純底物，通過尿素包合法去除飽和脂肪酸。
S2：使用嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus NTV001)來源的脂肪酸水合酶 FA-HY2，通過菌株發(fā)酵制取酶體以進行催化提純。以pH7.5的Tris-HCl溶液為緩沖液，配置反應(yīng)體系如下：200mg混合脂肪酸，FA-HY2酶添加量為5％ (w/w)，0.5％ (v/v)表面活性劑吐溫 20，25℃ ,800rpm恒溫金屬浴反應(yīng)器中進行水合反應(yīng)30h，定時取樣，利用氣相測得亞麻酸純度。
S3：反應(yīng)結(jié)束得羥基脂肪酸和脂肪酸(亞麻酸)混合物，以二氯甲烷：無水甲醇(v:v)＝40:1為展開劑進行硅膠柱層析后即得目標(biāo)產(chǎn)物亞麻酸和副產(chǎn)物羥基脂肪酸。經(jīng)測算，本實例中經(jīng)單次純化-分離ALA的純度75.09％，兩次純化-分離ALA的純 度為83.65％和收率為75.42％。
實施例2
與實施例1的不同之處在于：
S1：以亞麻籽油為提純底物。
S2：使用梭形桿菌(Lysinibacillus fusiformis)來源的脂肪酸水合酶LfOAH；緩沖液以及 pH為：PBS緩沖液，pH為8.0，進行水合反應(yīng)26h。
S3：以石油醚：無水乙醇(v:v)＝20:1為展開劑進行硅膠柱層析后即得目標(biāo)產(chǎn)物亞麻酸和副產(chǎn)物羥基脂肪酸。
經(jīng)測算，本實施例中經(jīng)單次純化-分離ALA的純度84.35％，兩次純化-分離ALA的純度為91.06％和收率為82.93％。
實施例3
與實施例1的不同之處在于：
S2：構(gòu)建工程菌生產(chǎn)脂肪酸水合酶BbMCRA2 (Bifidobacterium breve NCIMB 702258)，表達(dá)載體為pET-28a(+)。100g混合脂肪酸，酶添加量為10％(w/w)；反應(yīng)溫度為25℃ , 使用攪拌槳與圓底燒瓶進行反應(yīng)，轉(zhuǎn)速為300rpm。
S3：使用丙酮低溫冷凍結(jié)晶法后即得目標(biāo)產(chǎn)物亞麻酸和副產(chǎn)物羥基脂肪酸。經(jīng)測算，本實施例中經(jīng)單次純化-分離ALA的純度77 .20％，兩次純化-分離ALA的純度為86 .99% 和收率為84.36％。
實施例4
與實施例1的不同之處在于：
S1：以亞麻籽油為提純底物。
S2：構(gòu)建工程菌生產(chǎn)脂肪酸水合酶BbMCRA2 (Bifidobacterium breve NCIMB 702258)，表達(dá)載體為pET-22b(+)。100g混合脂肪酸，酶添加量為12％(w/w)；反應(yīng)溫度為25 ℃，使用攪拌槳與圓底燒瓶進行反應(yīng)，轉(zhuǎn)速為280rpm。
S3：以二氯甲烷：無水甲醇(v:v)＝40:1為展開劑進行硅膠柱層析后即得目標(biāo)產(chǎn)物亞麻酸和副產(chǎn)物羥基脂肪酸。
經(jīng)測算，本實施例中經(jīng)單次純化-分離ALA的純度89.12％，兩次純化-分離ALA的純度為94.71％和收率為85.34％。
實施例5
與實施例4的不同之處在于：
S2：使用短雙歧桿菌(Bifidobacterium breve NCIMB 702258)來源的脂肪酸水合酶BbMCRA2。反應(yīng)溫度為22℃，轉(zhuǎn)速為500rpm。
S3：以石油醚：無水甲醇(v:v)＝25:1為展開劑進行硅膠柱層析后即得目標(biāo)產(chǎn)物亞麻酸和副產(chǎn)物羥基脂肪酸。
經(jīng)測算，本實施例中經(jīng)單次純化-分離ALA的純度76.0510％， 兩次純化-分離ALA的純度為90.44％和收率為82.06％。
通過控制時間的對照案例：
對照例1
與實施例1的不同之處在于：
S2：反應(yīng)時間為8h。
經(jīng)測算，本實施例中兩次純化-分離ALA的終純度為81.36％和收率為87.39％。
對照例2
與實施例2的不同之處在于：
S2：反應(yīng)時間為10h。
經(jīng)測算，本實施例中兩次純化-分離ALA的終純度為80.64％和收率為90.14％。
對照例3
與實施例3的不同之處在于：
S2：反應(yīng)時間為4h。
經(jīng)測算，本實施例中兩次純化-分離ALA的終純度為86.42％和收率為93.51％。
對照例4
與實施例4的不同之處在于：
S2：反應(yīng)時間為5h。
經(jīng)測算，本實施例中兩次純化-分離ALA的終純度為92.62％和收率為96.98％。
對照例5
與實施例5的不同之處在于：
S2：反應(yīng)時間為7h。
經(jīng)測算，本實施例中兩次純化-分離ALA的終純度為92.05％和收率為87.20％。
通過對照例1-5，過長的時間會造成較多的脂肪酸被催化成羥基脂肪酸，降低了產(chǎn)物的收率，同時增加了工業(yè)生產(chǎn)成本；較短的時間則可能無法達(dá)到理想的純度，無法滿足對于高純度亞麻酸的提純要求。根據(jù)酶的催化選擇性與速度的差異，通過對時間的控制可以有效提高收率，并將反應(yīng)純度維持在理想的水平。
通過改變不同來源的水合酶的對照案例：
對照例6
與實施例1的不同之處在于：
S2：使用金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)來源的脂肪酸水合酶OhyA。
經(jīng)測算，本實施例中ALA的終純度為69.55％和收率為24.15％。
對照例7
與實施例1的不同之處在于：
S2：使用腦膜炎敗血伊麗莎白菌(Elizabethkingia Meningoseptica)來源的脂肪酸水合酶Em-OAH。
經(jīng)測算，本實施例中ALA的終純度為64.09％和收率為20.42％。
通過對照例6-7，大部分的水合酶沒有拆分能力，實驗結(jié)果表明他們并不能有效的提升亞麻酸的純度且收率極低(大部分亞麻酸都被催化為了羥基脂肪酸)，他們不能實現(xiàn)對亞麻酸的純化和拆分，只有找到具有反應(yīng)速度差的水合酶，并且通過控制條件加大其反應(yīng)能力的差別，才能實現(xiàn)對亞麻酸的催化動力學(xué)差異的拆分。
文章摘自國家發(fā)明專利，發(fā)明人：聶開立，蘆東，金淑銘，劉佳豪，鄧?yán)?，王?/font>；申請?zhí)枺?/font>202311737533.3；申請日：2023.12.17
