摘 要: 本發(fā)明公開一種產(chǎn)生果膠酶的菌株及在漢麻脫膠中的應(yīng)用，屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域。產(chǎn)生果膠酶的菌株的分類明命名為沃特曼籃狀菌 Talaromyces wortmannii，保藏單位為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，菌株保藏名稱為：HM01，保藏編號為：CGMCC No、41378，保藏日期為：2024年06月20日；菌株產(chǎn)生果膠酶，不產(chǎn)生纖維素酶，將菌株發(fā)酵液噴灑至漢麻桿可使菌株在漢麻表皮定植生長即可提升漢麻的脫膠效果；其有效提高漢麻雨露脫膠效果，加快雨露脫膠速度，提高漢麻麻皮與麻桿的分離效果，促進漢麻纖維產(chǎn)業(yè)的高質(zhì)量發(fā)展。
權(quán)利要求書
1.一種產(chǎn)生果膠酶的菌株，其特征在于：所述產(chǎn)生果膠酶的菌株的分類明命名為沃特曼籃狀菌 Talaromyces wortmannii，保藏單位為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學(xué)院微生物研究所，菌株保藏名稱為：HM01，保藏編號為：CGMCC No、41378，保藏日期為：2024年06月20日。
2.一種權(quán)利要求1所述產(chǎn)生果膠酶的菌株的應(yīng)用，利用沃特曼籃狀菌 Talaromyces wortmannii HM01對漢麻脫果膠。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，沃特曼籃狀菌 Talaromyces wortmannii HM01發(fā)酵生產(chǎn)的果膠酶對漢麻脫果膠。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，沃特曼籃狀菌 Talaromyces wortmannii HM01生產(chǎn)果膠酶的過程如下：
a1、將菌種 Talaromyces wortmannii HM01接種于種子液培養(yǎng)基后置于搖床中，搖床恒溫28℃、轉(zhuǎn)速180rpm培養(yǎng)48h后獲得種子液；
a2、將種子液按0.5％(v/v)的比例轉(zhuǎn)接到發(fā)酵培養(yǎng)基中后放入搖床，搖床恒溫28℃轉(zhuǎn)速180rpm培養(yǎng)96h獲得酶活發(fā)酵液；
a3、將酶活發(fā)酵液在相對離心力為13000g的條件下離心5min，收集上清液，測定上清液中的果膠酶活性達到324U/mL。
5.據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述種子液培養(yǎng)基成分為：果膠10g/L，(NH4)2SO41.5g/L，K2HPO41.0g/L，KCl0.5g/L，MgSO40.5g/L，F(xiàn)eSO40.1g/L。
6.據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述發(fā)酵培養(yǎng)基成分為：陳皮粉10g/L，(NH4)2SO41.5g/L，K2HPO41.0g/L，KCl0.5g/L，MgSO40.5g/L，F(xiàn)eSO40.1g/L。
7.據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，用于果膠酶生產(chǎn)的沃特曼籃狀菌Talaromyces wortmannii HM01的篩選過程如下
b1、沃特曼籃狀菌的富集培養(yǎng)：選取表面具有霉點、霉斑的漢麻桿，將其表皮揭下后剪成約5mm的小段置于無菌生理鹽水中充分震蕩，隨后將其梯度稀釋涂布于馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基PDA，于28℃培養(yǎng)3天后從PDA中挑取形態(tài)學(xué)上符合真菌特征的菌株進行初篩。
b2、初篩：將初篩得到的菌株進行菌種純化，將菌種點種于固體纖維素培養(yǎng)基的中央，于28℃培養(yǎng)5天后向固體纖維素培養(yǎng)基表面滴加剛果紅溶液進行染色，選擇不能在纖維素培養(yǎng)基生長或不具有明顯透明圈的菌株進行復(fù)篩；
b3、復(fù)篩：將初篩所得菌株點種于固體果膠培養(yǎng)基的中央，于28℃培養(yǎng)5天后向固體果膠培養(yǎng)基表面滴加碘液進行染色，測定和計算其透明圈直徑與菌落直徑的比值，選取比值最大的一株菌即為篩選后的菌種。
8.一種利用權(quán)利要求4所述果膠酶在漢麻脫膠中的應(yīng)用，其特征在于，將菌種 Talaromyces wortmannii HM01接種于種子液培養(yǎng)基中，搖床轉(zhuǎn)速180rpm、溫度28℃培養(yǎng)48h，接著將所得種子液按0.5％(v/v)的比例轉(zhuǎn)接到PDA培養(yǎng)基中，搖床轉(zhuǎn)速180rpm、溫度28℃培養(yǎng)96h獲得脫膠發(fā)酵液；將脫膠發(fā)酵液噴灑在漢麻桿上，脫膠發(fā)酵液在漢麻桿表皮引起明顯的菌株定植現(xiàn)象，并提升脫膠的效果。
9.據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，利用脫膠發(fā)酵液處理漢麻桿具體步驟如下：
c1、微生物定植分析：將漢麻桿截成20cm的長度平鋪在容器內(nèi)；將脫膠發(fā)酵液裝入噴壺內(nèi)，以0.1mL發(fā)酵液/g漢麻的比例噴灑至漢麻桿表面；隨后將漢麻桿于室溫環(huán)境靜置3天，觀察漢麻表面微生物定植情況；
c2、脫膠效果測定：將脫膠發(fā)酵液在13000g、4℃的條件下離心5min，取上清液；將漢麻表皮用清水清洗晾干，隨后按1:1(w/v)的比例將表皮浸于發(fā)酵上清液中，于搖床28℃、100rpm的條件下孵育5h即可實現(xiàn)脫膠處理。
10.據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，將孵育后的漢麻表皮用清水清洗晾干，稱量處理前后漢麻表皮的干重從而計算出脫膠率，脫膠率＝[(處理前干重 處理后干重)/處理前干重]×100％。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種產(chǎn)生果膠酶的菌株及在漢麻脫膠中的應(yīng)用。
背景技術(shù)
漢麻是漢麻科漢麻屬的一年生草本植物，是最早應(yīng)用于紡織業(yè)的植物之一。我國的漢麻種植歷史悠久，產(chǎn)量居世界第一。漢麻纖維是從漢麻桿上分離得到的韌皮組織，通常也稱為原麻。漢麻纖維的化學(xué)組分主要包括纖維素和膠質(zhì)兩大類，后者則主要由果膠、水溶物、半纖維素和木質(zhì)素等非纖維素成分構(gòu)成。膠質(zhì)會影響漢麻纖維的可紡性，因此原麻需要經(jīng)過脫膠處理才能作為紡織原料使用。
目前工業(yè)上常用的脫膠方法包括物理脫膠、化學(xué)脫膠和生物脫膠。物理脫膠是使用碾壓、超聲波及氣爆等方法進行處理，但該法脫膠不徹底，且能耗一般較高；化學(xué)脫膠是通過堿處理或氧化處理的方法進行脫膠，其脫膠效果好、工藝較為成熟，但仍存在著能耗高、污染大等問題；生物脫膠是利用微生物或酶的作用特異性地分解原麻中的膠質(zhì)、保留纖維素成分的方法，該方法工藝簡單、能耗較低、綠色環(huán)保。然而，目前能用于漢麻脫膠的菌株種類少，酶活及酶產(chǎn)量低，這些因素限制了生物脫膠技術(shù)的推廣應(yīng)用。
常用于漢麻脫膠的微生物包括真菌和細菌兩大類。與細菌相比，真菌在漢麻脫膠中具有明顯的優(yōu)勢：一是真菌的酶產(chǎn)量大、酶活性高；二是真菌對于木質(zhì)素等抗降解成分具有較強的分解能力，而細菌一般不能降解木質(zhì)素；三是真菌噴施后更容易在漢麻表面定植，并產(chǎn)生孢子擴散，能長時間地發(fā)揮脫膠作用。因此整體而言，真菌的脫膠能力更強、效果更好。然而，真菌在應(yīng)用上也有一些障礙：一方面，真菌的酶系更加豐富，它在分解膠質(zhì)時往往同時產(chǎn)生纖維素酶，這會導(dǎo)致漢麻纖維水解、損害其可紡性；另一方面，真菌在液體培養(yǎng)時會形成菌絲球，這種顆粒狀結(jié)構(gòu)會堵塞管路和噴口，不利于使用設(shè)備進行田間噴施。因此，開發(fā)適宜脫膠應(yīng)用的新型真菌資源成為了研究的熱點方向。
發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供一種產(chǎn)生果膠酶的菌株及在漢麻脫膠中的應(yīng)用，其只產(chǎn)生果膠酶，不產(chǎn)生纖維素酶，將菌株發(fā)酵液噴灑至漢麻桿可使菌株在漢麻表皮定植生長即可提升漢麻的脫膠效果；其有效提高漢麻雨露脫膠效果，加快雨露脫膠速度，提高漢麻麻皮與麻桿的分離效果，促進漢麻纖維產(chǎn)業(yè)的高質(zhì)量發(fā)展。
所述產(chǎn)生果膠酶的菌株的分類明命名為沃特曼籃狀菌 Talaromyces wortmannii，保藏單位為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學(xué)院微生物研究所，菌株保藏名稱為：HM01，保藏編號為：CGMCC No、41378，保藏日期為：2024年06月20日。
一種產(chǎn)生果膠酶的菌株的應(yīng)用，利用沃特曼籃狀菌Talaromyces wortmannii HM01對漢麻脫果膠。
進一步，利用沃特曼籃狀菌 Talaromyces wortmannii HM01發(fā)酵生產(chǎn)的果膠酶對漢麻脫果膠。
進一步，沃特曼籃狀菌 Talaromyces wortmannii HM01生產(chǎn)的果膠酶的過程如下：
a1、將菌種 Talaromyces wortmannii HM01接種于種子液培養(yǎng)基后置于搖床中，搖床恒溫28℃、轉(zhuǎn)速180rpm培養(yǎng)48h后獲得種子液；
a2、將種子液按0.5％(v/v)的比例轉(zhuǎn)接到發(fā)酵培養(yǎng)基中后放入搖床，搖床恒溫28℃轉(zhuǎn)速180rpm培養(yǎng)96h獲得酶活發(fā)酵液；
a3、將酶活發(fā)酵液在相對離心力為13000g的條件下離心5min，收集上清液，測定上清液中的果膠酶活性達到324U/mL。
進一步，所述種子液培養(yǎng)基成分為：果膠10g/L，(NH4)2SO41.5g/L，K2HPO41.0g/L，KCl0.5g/L，MgSO40.5g/L，F(xiàn)eSO40.1g/L。
進一步，所述發(fā)酵培養(yǎng)基成分為：陳皮粉10g/L，(NH4)2SO41.5g/L，K2HPO41.0g/L，KCl0.5g/L，MgSO40.5g/L，F(xiàn)eSO40.1g/L。
進一步，用于果膠酶生產(chǎn)的沃特曼籃狀菌 Talaromyces wortmannii HM01的篩選過程如下：
b1、沃特曼籃狀菌的富集培養(yǎng)：選取表面具有霉點、霉斑的漢麻桿，將其表皮揭下后剪成約5mm的小段置于無菌生理鹽水中充分震蕩，隨后將其梯度稀釋涂布于馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基PDA，于28℃培養(yǎng)3天后從PDA中挑取形態(tài)學(xué)上符合真菌特征的菌株進行初篩。
b2、初篩：將初篩得到的菌株進行菌種純化，將菌種點種于固體纖維素培養(yǎng)基的中央，于28℃培養(yǎng)5天后向固體纖維素培養(yǎng)基表面滴加剛果紅溶液進行染色，選擇不能在纖維素培養(yǎng)基生長或不具有明顯透明圈的菌株進行復(fù)篩；
b3、復(fù)篩：將初篩所得菌株點種于固體果膠培養(yǎng)基的中央，于28℃培養(yǎng)5天后向固體果膠培養(yǎng)基表面滴加碘液進行染色，測定和計算其透明圈直徑與菌落直徑的比值，選取比值最大的一株菌即為篩選后的菌種。
一種利用果膠酶在漢麻脫膠中的應(yīng)用，將菌種 Talaromyces wortmannii HM01接種于種子液培養(yǎng)基中，搖床轉(zhuǎn)速180rpm、溫度28℃培養(yǎng)48h，接著將所得種子液按0.5％(v/v)的比例轉(zhuǎn)接到PDA培養(yǎng)基中，搖床轉(zhuǎn)速180rpm、溫度28℃培養(yǎng)96h獲得脫膠發(fā)酵液；將脫膠發(fā)酵液噴灑在漢麻桿上，脫膠發(fā)酵液在漢麻桿表皮引起明顯的菌株定植現(xiàn)象，并提升脫膠的效果。
進一步，利用脫膠發(fā)酵液處理漢麻桿具體步驟如下：
c1、微生物定植分析：將漢麻桿截成20cm的長度平鋪在容器內(nèi)；將脫膠發(fā)酵液裝入噴壺內(nèi)，以0.1mL發(fā)酵液/g漢麻的比例噴灑至漢麻桿表面；隨后將漢麻桿于室溫環(huán)境靜置3天，觀察漢麻表面微生物定植情況；
c2、脫膠效果測定：將脫膠發(fā)酵液在13000g、4℃的條件下離心5min，取上清液；將漢麻表皮用清水清洗晾干，隨后按1:1(w/v)的比例將表皮浸于發(fā)酵上清液中，于搖床28℃、100rpm的條件下孵育5h即可實現(xiàn)脫膠處理。
進一步，將孵育后的漢麻表皮用清水清洗晾干，稱量處理前后漢麻表皮的干重從而計算出脫膠率，脫膠率＝[(處理前干重 處理后干重)/處理前干重]×100％。
有益效果：a、本發(fā)明所用的菌株 Talaromyces wortmannii HM01生長速度快，發(fā)酵周期短，在以陳皮粉為碳源的發(fā)酵培養(yǎng)基中果膠酶活性高，能作為生產(chǎn)果膠酶的菌株資源；b、本發(fā)明所用的菌株 Talaromyces wortmannii HM01在PDA培養(yǎng)基中能產(chǎn)生高活性的果膠酶，但幾乎不產(chǎn)生纖維素酶，可有效避免粗發(fā)酵液噴施至漢麻桿后對漢麻纖維造成損害；c、本發(fā)明所用的菌株 Talaromyces wortmannii HM01在PDA培養(yǎng)基中不形成菌絲球，可不進行額外處理直接裝載于噴壺、農(nóng)機、無人機等設(shè)備進行噴灑，不會堵塞管路、噴口；d、本發(fā)明所用的菌株 Talaromyces wortmannii HM01屬于真菌，能有效在漢麻桿表面定植，且能產(chǎn)生孢子在麻桿間擴散，在露天環(huán)境下施用也能取得良好的脫膠效果；e、本發(fā)明所用的菌株 Talaromyces wortmannii HM01原位分離于黑龍江省漢麻種植區(qū)的漢麻秸稈上，具有較強的漢麻種植環(huán)境的適應(yīng)性。
附圖說明
圖1為本發(fā)明產(chǎn)生果膠酶的菌株 Talaromyces wortmannii HM01的菌落形態(tài)圖；
圖1
圖2為本發(fā)明產(chǎn)生果膠酶的菌株的ITS片段擴增結(jié)果圖；
圖3為本發(fā)明產(chǎn)生果膠酶的菌株系統(tǒng)發(fā)育樹圖；
圖3
圖4為本發(fā)明實施例中產(chǎn)生果膠酶的菌株 Talaromyces wortmannii HM01在漢麻表皮的定植效果示意圖。
圖4
具體實施方式
下面結(jié)合說明書附圖的內(nèi)容對本發(fā)明的實施例做進一步說明：
本發(fā)明公開一種產(chǎn)生果膠酶的菌株，所述產(chǎn)生果膠酶的菌株的分類明命名為沃特曼籃狀菌 Talaromyces wortmannii，保藏單位為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學(xué)院微生物研究所，菌株保藏名稱為：HM01，保藏編號為：CGMCC No、41378，保藏日期為：2024年06月20日，該菌株原位分離自黑龍江省漢麻秸稈，具有較好的漢麻種植環(huán)境適應(yīng)性。有利于提高漢麻雨露脫膠效果，加快雨露脫膠速度，提高漢麻麻皮與麻桿的分離效果，促進漢麻纖維產(chǎn)業(yè)的高質(zhì)量發(fā)展，具體如圖1所示。
1、果膠酶生產(chǎn)菌的篩選
a、真菌的富集培養(yǎng)：選取表面具有霉點、霉斑的漢麻桿，將其表皮揭下后剪成約5mm的小段置于無菌生理鹽水中充分震蕩，隨后將其梯度稀釋涂布于馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)，于28℃培養(yǎng)3天后挑取形態(tài)學(xué)上符合真菌特征的菌株進行初篩。
b、初篩：將上一步得到的真菌進行菌種純化，隨后點種于固體纖維素培養(yǎng)基的中央，于28℃培養(yǎng)5天后向培養(yǎng)基表面滴加剛果紅溶液進行染色，選擇不能在纖維素培養(yǎng)基生長或不具有明顯透明圈的菌株進行復(fù)篩。
c、復(fù)篩：將初篩所得菌株點種于固體果膠培養(yǎng)基的中央，于28℃培養(yǎng)5天后向培養(yǎng)基表面滴加碘液進行染色，測定和計算其透明圈直徑與菌落直徑的比值，選擇比值最大的一株菌進行后續(xù)實驗。
2、果膠酶生產(chǎn)菌的鑒定
a、形態(tài)學(xué)鑒定：在PDA培養(yǎng)基上，28℃培養(yǎng)5天形成典型菌落。菌落近圓形，輪廓規(guī)則，外觀綿密緊致，正面呈墨綠色，邊緣為白色，背面為淺綠色，且產(chǎn)橘黃色物質(zhì)。
b、分子生物學(xué)鑒定：取新鮮菌絲50mg，加液氮研磨，用試劑盒提取其基因組DNA。以該基因組DNA為模板，利用通用引物ITS1(5’ TCCGTAGGTGAACCTGCGG 3’)和ITS4(5’ TCCTCCGCTTATTGATATGC 3’)進行PCR，擴增得到一約700bp長度的片段，菌株的ITS片段擴增結(jié)果如圖2所示；對該片段測序后將序列在NCBI中進行BLAST比對分析，結(jié)果表明菌株的ITS序列與 Talaromyces wortmannii ITS序列的一致性最高，達98％；利用MEGA7.0軟件構(gòu)建ITS序列的系統(tǒng)發(fā)育樹，如圖3所示，發(fā)現(xiàn)該菌株與 Talaromyces wortmannii親緣關(guān)系最近。結(jié)合形態(tài)學(xué)特征，將分離所得的菌株鑒定為 Talaromyces wortmannii。
菌株的ITS片段測序結(jié)果為；
AATGATCCTTCCGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTACCGAGTGCGGGTTCTCACGAGCCCAACCTCCCACCCGTGTTTACCGTTACCGCGTTGCCTCGGCGGGCCCACTGGGGCCTGGCCCCGGTCGCCGGGGGGCTTCTGCCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGACGCACCCTAGAACCCTGCCTGAATAGTGAGTCTGAGTGAGATTTGAAATCATTAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGCATTCCGGGGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCTGCCCTCCAGCACGGCTGGGTGTTGGGCGCTGTCCCCCCGGGGACACGCCCCAAAAGCAGTGGCGGCGCCGCGTCGGGTCCTCGAGCGTATGGGGCTTTGTCACCCGCTCGGGAGGGACTCGGTCGGCGCTGGTCTTCCCTTTAGGCCGCCCTTCGGGGTGCGCCTCTTCCGGTGACCTCGGATCAGGTAGACACCCGATTGC。
3、酶活測定
a、粗酶液提取：將菌種 Talaromyces wortmannii HM01接種于種子液培養(yǎng)基中，搖床180rpm、28℃培養(yǎng)48h，接著將所得種子液按0.5％(v/v)的比例轉(zhuǎn)接到發(fā)酵培養(yǎng)基中，搖床180rpm、28℃培養(yǎng)96h獲得酶活發(fā)酵液，最后將發(fā)酵液于13000g、4℃離心5min，收集上清液作為酶液；將上清液在沸水浴中孵育30min，冷卻后作為酶液的失活對照。
b、果膠酶活性測定：用pH5.0的磷酸緩沖液配置0.2％的果膠溶液作為底物，用相同的緩沖液對酶液進行適當(dāng)稀釋；取100μL底物溶液和50μL酶稀釋液加入到一個1.5mL離心管中，混勻后于50℃反應(yīng)10min，隨后立即加入200μLDNS試劑終止反應(yīng)；將體系混勻后置于沸水浴反應(yīng)5min，冷卻后加入1mL去離子水稀釋；測定反應(yīng)液在520nm處的吸光度值，再根據(jù)標(biāo)準曲線計算產(chǎn)物釋放量和酶活性。在本體系中，每分鐘產(chǎn)生1μmol產(chǎn)物所需的酶量被定義為1個活力單位，結(jié)果顯示酶活發(fā)酵液的果膠酶活性達到324U/mL。
c、纖維素酶活性測定：用pH5.0的磷酸緩沖液配置0.2％的羧甲基纖維素鈉溶液作為底物，用相同的緩沖液對酶液進行適當(dāng)稀釋；取100μL底物溶液和50μL酶稀釋液加入到一個1.5mL離心管中，混勻后于50℃反應(yīng)10min，隨后立即加入200μLDNS試劑終止反應(yīng)；將體系混勻后置于沸水浴反應(yīng)5min，冷卻后加入1mL去離子水稀釋；測定反應(yīng)液在520nm處的吸光度值，再根據(jù)標(biāo)準曲線計算產(chǎn)物釋放量和酶活性。在本體系中，每分鐘產(chǎn)生1μmol產(chǎn)物所需的酶量被定義為1個活力單位，結(jié)果顯示酶活發(fā)酵液幾乎不含纖維素酶活性。
4、利用 Talaromyces wortmannii 脫膠發(fā)酵液處理漢麻桿
a、微生物定植分析：將漢麻桿截成20cm左右的長度平鋪在容器內(nèi)；將脫膠發(fā)酵液裝到噴壺內(nèi)，以0.1mL發(fā)酵液/g漢麻的比例噴灑至漢麻桿表面；隨后將漢麻桿于室溫環(huán)境靜置3天，觀察漢麻表面微生物定植情況。
b、脫膠效果測定：將脫膠發(fā)酵液在13000g、4℃的條件下離心5min，取上清液；將漢麻表皮用清水清洗晾干，隨后按1:1(w/v)的比例將表皮浸于發(fā)酵上清液中，于28℃、100rpm條件下孵育5h；將處理后的表皮用清水清洗晾干。稱量處理前后表皮的干重計算脫膠率：
脫膠率＝[(處理前干重 處理后干重)/處理前干重]×100％
實施例1：果膠酶產(chǎn)生菌的篩選鑒定和產(chǎn)酶發(fā)酵
5、配制培養(yǎng)基：
a、種子液培養(yǎng)基：果膠10g/L，(NH4)2SO41.5g/L，K2HPO41.0g/L，KCl0.5g/L，MgSO40.5g/L，F(xiàn)eSO40.1g/L，pH值自然，115℃滅菌30min；
b、發(fā)酵培養(yǎng)基：陳皮粉10g/L，(NH4)2SO41.5g/L，K2HPO41.0g/L，KCl0.5g/L，MgSO40.5g/L，F(xiàn)eSO40.1g/L，pH值自然，115℃滅菌30min；
c、PDA培養(yǎng)基：稱取200g馬鈴薯切塊，加水煮沸30分鐘，用八層紗布過濾，向濾液加入20g葡萄糖攪拌溶解，冷卻后定容至1L，pH值自然，115℃滅菌30min。
實施例2：果膠酶產(chǎn)生菌改善漢麻脫膠效果
6、配制培養(yǎng)基
a、種子液培養(yǎng)基：果膠10g/L，(NH4)2SO41.5g/L，K2HPO41.0g/L，KCl0.5g/L，MgSO40.5g/L，F(xiàn)eSO40.1g/L，pH值自然，115℃滅菌30min；
b、PDA培養(yǎng)基：稱取200g馬鈴薯切塊，加水煮沸30分鐘，用八層紗布過濾，向濾液加入20g葡萄糖攪拌溶解，冷卻后定容至1L，pH值自然，115℃滅菌30min。
7、脫膠發(fā)酵液制備
將菌種 Talaromyces wortmannii HM01接種于種子液培養(yǎng)基中，180rpm、28℃搖床培養(yǎng)48h，接著將所得種子液按0.5％(v/v)的比例轉(zhuǎn)接到PDA培養(yǎng)基中，180rpm、28℃搖床培養(yǎng)96h獲得脫膠發(fā)酵液。
8、如圖4所示，利用脫膠發(fā)酵液處理漢麻桿
a、微生物定植分析：將漢麻桿截成20cm左右的長度，平鋪在容器內(nèi)；將脫膠發(fā)酵液裝到噴壺內(nèi)，以0.1mL發(fā)酵液/g漢麻的比例噴灑至漢麻桿表面；隨后將漢麻桿于室溫環(huán)境靜置3天，觀察漢麻表面微生物定植情況，結(jié)果表明噴施發(fā)酵液可在表皮引起明顯的菌株定植現(xiàn)象，并提升脫膠的效果。
b、脫膠效果測定：將脫膠發(fā)酵液在13000g、4℃的條件下離心5min，取上清液；將漢麻表皮用清水清洗晾干，隨后按1:1(w/v)的比例將表皮浸于發(fā)酵上清液中，于28℃，100rpm條件下孵育5h；將處理后的表皮用清水清洗晾干。稱量處理前后表皮的干重計算脫膠率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)脫膠率顯著提升。
文章摘自國家發(fā)明專利，一種產(chǎn)生果膠酶的菌株及在漢麻脫膠中的應(yīng)用，發(fā)明人:劉偉杰，劉佳文，董振，張瑩，劉聰，孫地，朱靜榕，申請?zhí)枺?/font>202411256784.4，申請日，2024.09.09。
