作者：韓鑫垚等
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發(fā)布時(shí)間：2022-09-05
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[麻進(jìn)展]漢麻提取物延緩皮膚衰老作用研究韓鑫垚
摘 要：考察不同漢麻提取物，即CBD（大麻二酚）晶體、CBD廣譜油和86.69%CBD油在皮膚衰老過(guò)程對(duì)透明質(zhì)酸酶、膠原蛋白酶和彈性蛋白酶的抑制作用，實(shí)現(xiàn)天然植物對(duì)皮膚抗衰老活性的初步探究。實(shí)驗(yàn)中以EGCG（茶多酚）作為陽(yáng)性對(duì)照，使用酶標(biāo)儀測(cè)定樣品的吸光度，利用公式計(jì)算不同漢麻提取物對(duì)酶的抑制率。結(jié)果表明，與EGCG陽(yáng)性曲線(xiàn)對(duì)照相比，發(fā)現(xiàn)漢麻提取物對(duì)透明質(zhì)酸酶、膠原蛋白酶和彈性蛋白酶抑制作用明顯，具有良好的皮膚抗衰老功效。其中86.69%CBD油對(duì)透明質(zhì)酸酶的抑制效果較好，CBD廣譜油對(duì)膠原蛋白酶的抑制效果明顯，CBD晶體和CBD廣譜油對(duì)彈性蛋白酶抑制作用顯著，以上結(jié)果為漢麻提取物在醫(yī)藥和化妝品行業(yè)的產(chǎn)品研究提供了一定的數(shù)據(jù)參考和科學(xué)依據(jù)。
關(guān)鍵詞：漢麻提取物；透明質(zhì)酸酶；膠原蛋白酶；彈性蛋白酶；皮膚抗衰老；
引言
近年來(lái)，人口老齡化形勢(shì)日漸嚴(yán)峻，皮膚抗衰老化妝品的開(kāi)發(fā)成為研究熱點(diǎn)[1,2]?；瘜W(xué)制劑作為抗衰老劑不僅危害人體健康，同時(shí)也會(huì)對(duì)環(huán)境帶來(lái)負(fù)面影響。天然植物提取物中的活性成分具有良好的抗氧化性，同時(shí)具有抗敏性、毒副作用小、溫和、適應(yīng)面廣等優(yōu)點(diǎn)，引起世界各國(guó)醫(yī)藥與化妝品行業(yè)的關(guān)注。目前，已被開(kāi)發(fā)作為抗衰老劑的天然植物有茶多酚、葡萄籽和蝦青素等[3,4,5]。
漢麻，為?？拼舐閷僖荒晟牟荼局参?，在我國(guó)具有悠久的栽培歷史[6]。漢麻中主要含有大麻二酚（CBD）和四氫大麻酚[7]。四氫大麻酚具有致幻和成癮性，已被列入第一類(lèi)精神藥品品種目錄管制。相反，大麻二酚不具備精神活性，其具有抗氧化、抗炎活性、抗抑郁、抗菌活性等療效，在醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)及化妝品領(lǐng)域中具有重要應(yīng)用[8,9]。
研究不同漢麻提取物的皮膚抗衰老活性，通過(guò)測(cè)定CBD晶體、CBD廣譜油和86.69%CBD油對(duì)透明質(zhì)酸酶、膠原蛋白酶和彈性蛋白酶的抑制率，從而分析其在抗衰老過(guò)程的作用。
1實(shí)驗(yàn)
1.1試劑與儀器
試劑：甲醇（天津大茂化學(xué)試劑廠(chǎng)）；磷酸二氫鈉（天津大茂化學(xué)試劑廠(chǎng)）；磷酸氫二鈉（天津大茂化學(xué)試劑廠(chǎng)）；彈性蛋白酶（美國(guó)Sigma公司）；膠原蛋白酶（美國(guó)Sigma公司）；N-（3-[2-呋喃基]丙烯酰）-亮氨酰-甘氨酰-脯氨酰-丙氨酸（FALGPA，美國(guó)Sigma公司）；牛血清白蛋白（美國(guó)Sigma公司）；茶多酚（EGCG，美國(guó)Sigma公司）；N-琥珀?；?三-丙氨酸-對(duì)硝基苯胺（SANA，美國(guó)Sigma公司）；透明質(zhì)酸酶（美國(guó)Sigma公司）；透明質(zhì)酸（美國(guó)Sigma公司）；CBD晶體（中升生物科技有限公司）；CBD廣譜油（中升生物科技有限公司）；86.26%CBD油；Tris-HCl緩沖鹽（上海阿拉丁生物科技有限公司）。
儀器：FC型酶標(biāo)儀（賽默飛世爾儀器有限公司）；超聲清洗儀（上海豫明儀器有限公司）；79-1磁力加熱攪拌器（山東鄴城華魯電熱儀器有限公司）；電熱鼓風(fēng)干燥箱（南京儀器廠(chǎng)）。
1.2漢麻提取物抑制透明質(zhì)酸酶實(shí)驗(yàn)
在96孔板中，依次加入樣品溶液與透明質(zhì)酸酶溶液，磷酸緩沖液，透明質(zhì)酸鈉溶液，震蕩混勻，在37℃孵育45min，加入酸性白蛋白溶液。用酶標(biāo)儀測(cè)定其在600nm處的吸光度。以EGCG為陽(yáng)性對(duì)照，每個(gè)樣品重復(fù)三次。
1.3漢麻提取物抑制膠原蛋白酶實(shí)驗(yàn)
在96孔板中，依次加入樣品溶液與膠原蛋白酶溶液，Tris-HCl緩沖液，震蕩混勻，在37℃孵育15min，加入FALGPA溶液。用酶標(biāo)儀測(cè)定其在345nm處的吸光度。以EGCG為陽(yáng)性對(duì)照，每個(gè)樣品重復(fù)三次。
1.4漢麻提取物抑制彈性蛋白酶實(shí)驗(yàn)
在96孔板中，依次加入樣品溶液與彈性蛋白酶溶液，Tris-HCl緩沖液，震蕩混勻，在37℃孵育15min；加入SANA溶液，在37°C恒溫箱中孵育20min后，用酶標(biāo)儀測(cè)定其在410nm處的吸光度。以EGCG為陽(yáng)性對(duì)照，每個(gè)樣品重復(fù)三次。
抑制率按下列公式計(jì)算：
抑制率（%）=（1-A空白/A樣品）×100%
式中，A樣品:樣品溶液、透明質(zhì)酸鈉（FALGPA，SANA）、磷酸緩沖液、透明質(zhì)酸（膠原蛋白、彈性蛋白）酶混合物的吸光度；A空白:透明質(zhì)酸鈉（FALGPA，SANA）溶液、磷酸緩沖液、透明質(zhì)酸（膠原蛋白、彈性蛋白）酶混合物的吸光度。
2結(jié)果與討論
2.1漢麻提取物對(duì)透明質(zhì)酸酶抑制效果研究
從天然植物中提取出的多酚類(lèi)化合物，如茶多酚（EGCG），已被證實(shí)具有良好的抗氧化效果，能夠清除體內(nèi)自由基，抑制氧化反應(yīng)的發(fā)生，同時(shí)具有抗敏性，因而廣泛用于化妝品中。選用EGCG作為陽(yáng)性藥物作為對(duì)照，評(píng)價(jià)不同漢麻提取物樣品的抗衰老活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，隨著濃度的增大，所有樣品對(duì)透明質(zhì)酸酶的抑制率均增大，當(dāng)濃度為1.5mg/mL時(shí)，抑制率基本不再增加。當(dāng)濃度為1.5mg/mL時(shí)，茶多酚、CBD廣譜油、CBD晶體、86.69%CBD油對(duì)透明質(zhì)酸酶的抑制率分別為89.336%，90.309%，93.513%，94.121%。與EGCG陽(yáng)性對(duì)照相比得知，CBD廣譜油、CBD晶體、86.69%CBD樣品對(duì)透明質(zhì)酸酶的抑制率大于茶多酚，其中86.69%CBD油對(duì)酶的抑制效果最為明顯，說(shuō)明漢麻提取物可有效抑制透明質(zhì)酸酶的活性，維持皮膚中透明質(zhì)酸的水平，從而避免皮膚中水分的流失、促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)與代謝廢物交換的過(guò)程。
圖1 不同漢麻提取物對(duì)透明質(zhì)酸酶的抑制活性
2.2漢麻提取物對(duì)膠原蛋白酶抑制效果研究
隨著濃度的增大，所有樣品對(duì)膠原蛋白酶的抑制率均增大，當(dāng)濃度為1.5mg/mL時(shí)，抑制率基本不再增加。當(dāng)濃度為1.5mg/mL時(shí)，茶多酚、86.69%CBD，CBD晶體，CBD廣譜油對(duì)膠原蛋白酶的抑制率分別為75.255%，83.481%，83.512%，84.311%。與EGCG陽(yáng)性對(duì)照相比得知，CBD晶體，CBD廣譜油，86.69%CBD油對(duì)膠原蛋白酶的抑制率大于茶多酚，其中CBD廣譜油對(duì)酶的抑制效果最為明顯，說(shuō)明漢麻提取物可有效抑制膠原蛋白酶的活性，維持皮膚中膠原蛋白的水平，增強(qiáng)皮膚的彈性和強(qiáng)度，保持皮膚的柔韌性。
2.3漢麻提取物對(duì)彈性蛋白酶抑制效果研究
隨著濃度的增大，所有樣品對(duì)彈性蛋白酶的抑制率均增大，當(dāng)濃度為1.5mg/mL時(shí)，抑制率基本不再增加。當(dāng)濃度為1.5mg/mL時(shí)，茶多酚，86.69%CBD，CBD廣譜油，CBD晶體對(duì)彈性蛋白酶的抑制率分別為69.231%，90.924%，95.423%，95.433%。與EGCG陽(yáng)性對(duì)照相比得知，CBD晶體，CBD廣譜油，86.69%CBD油對(duì)彈性蛋白酶的抑制率大于茶多酚，其中CBD晶體和CBD廣譜油對(duì)酶的抑制效果均十分顯著，說(shuō)明漢麻提取物可有效抑制彈性蛋白酶的活性，維持皮膚中彈性蛋白的水平，使皮膚富有彈性，延緩皮膚衰老過(guò)程。
圖2 不同漢麻提取物對(duì)膠原蛋白酶的抑制活性
圖3 不同漢麻提取物對(duì)彈性蛋白酶的抑制活性
3結(jié)論
主要探討了不同漢麻提取物，即CBD晶體、CBD廣譜油、86.69%CBD油對(duì)透明質(zhì)酸酶、膠原蛋白酶及彈性蛋白酶的抑制作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明漢麻提取物抗衰老效果顯著，能很好地抑制透明質(zhì)酸酶、膠原蛋白酶和彈性蛋白酶的活性，延緩皮膚衰老過(guò)程，未來(lái)將在醫(yī)療領(lǐng)域和化妝品領(lǐng)域有廣闊的應(yīng)用前景。
參考文獻(xiàn)
[4]Rivera D，Rommi K，Fernandes M M，et al.Biocompounds from rapeseed oil industry co-stream as active ingredients for skin care applications[J].International Journal of Cosmetic Science，2015，37（5）:496-505.
文章摘自：韓鑫垚，王金鑫，張欣夢(mèng)，閆森博，王磊，陳雨欣，袁敏.漢麻提取物延緩皮膚衰老作用研究[J].佳木斯大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2022，40(03):111-113.
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