摘 要：目的： 研究羅布麻茶改善睡眠功效。方法： 通過小鼠經(jīng)口連續(xù)灌胃給予高劑量、中劑量和低劑量 3 種不同劑量的羅布麻茶 30 d，然后對給藥后小鼠的戊巴比妥鈉直接睡眠的實(shí)驗(yàn)、戊巴比妥鈉閾下劑量的催眠實(shí)驗(yàn)、巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)對羅布麻茶功效進(jìn)行評價(jià)。結(jié)果： 與陰性對照組比較，戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠時(shí)間羅布麻茶高劑量組顯著延長( P ＜ 0. 01) ，睡眠潛伏期明顯減短( P ＜ 0. 01) ； 羅布麻茶中劑量組小鼠睡眠時(shí)間延長( P ＜ 0. 05) ； 直接睡眠實(shí)驗(yàn)入睡動(dòng)物個(gè)數(shù)、睡眠時(shí)間及戊巴比妥鈉入睡發(fā)生率羅布麻茶高劑量組、羅布麻茶中劑量組、羅布麻茶低劑量組與陰性對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P ＞ 0. 05) ； 各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)小鼠體質(zhì)量羅布麻茶高劑量組、羅布麻茶中劑量組、羅布麻茶低劑量組與陰性對照組比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P ＞ 0. 05) 。結(jié)論： 羅布麻茶具有改善睡眠的功效。
關(guān)鍵詞：羅布麻茶； 小鼠； 戊巴比妥鈉； 巴比妥鈉； 催眠實(shí)驗(yàn)； 潛伏期； 功效評價(jià)； 改善睡眠
羅布麻( Apocynum venetum L. ) 屬夾竹桃科植物，《中華人民共和國藥典》記載，用鮮葉加工成的羅布麻茶功能主治“平肝安神、清熱利水、高血壓、神經(jīng)衰弱”等［1-2］。近幾年，具有保健功效的純天然產(chǎn)品受到亞健康人群的青睞，羅布麻作為天然草本藥物，隨著人們對其研究的日益深入，其保健功效也逐漸被人們所接受。羅布麻葉中含黃酮、有機(jī)酸、鞣質(zhì)、脂肪酸醇酯、氨基酸、礦物元素及其他物質(zhì)［3-5］。國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，羅布麻葉中的有效成分具有降血壓、降血脂、抗氧化、防抑郁、利尿、保護(hù)腎臟和保護(hù)心血管等作用［6-7］。目前國內(nèi)外對羅布麻茶中有效物質(zhì)改善睡眠功能的研究尚未見報(bào)道。
本研究所用羅布麻生長在東經(jīng) 87°33'； 北緯 47°42'的新疆阿勒泰阿拉哈克鄉(xiāng)東戈壁。本實(shí)驗(yàn)以小鼠為觀察對象，觀察羅布麻茶改善睡眠的功效，為產(chǎn)品的進(jìn)一步開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。
1材料與方法
1.1材料
1. 1. 1 動(dòng)物
選用新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供的美國癌癥研究所( Institute of Cancer Research，ICR) 雄 性 小 鼠 192 只［實(shí) 驗(yàn) 動(dòng) 物 生 產(chǎn) 許 可 證 號：SCXK( 新) 2018-0002，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證 SYXK( 新) 2018-0001］，5 ～ 6 周 齡，飼 養(yǎng) 室 溫 度( 23 ± 3 ) ℃、濕 度 40% ～ 70% 、噪 聲 ＜ 85 dB，12 h /12 h白天和黑夜循環(huán)照明，本實(shí)驗(yàn)方案交由實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理( 倫理) 委員會(huì)審查、批準(zhǔn)后實(shí)施完全按國家相關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利法規(guī)規(guī)定執(zhí)行( 倫理審批號：nGLP-2019015) 。
1. 1. 2 藥物
羅布麻茶，袋泡茶，內(nèi)容物為由羅布麻葉、五味子提取物、酸棗仁提取物組成的顆粒狀物質(zhì)，由阿勒泰戈寶茶股份有限公司生產(chǎn)提供，批號：20181116。推薦成人日攝入定型產(chǎn)品量 9 g /60 kg( 開水泡服，2 次/d，1 袋/次，4. 5 g /袋) ，以廠家提供的濃縮液( 褐色膏狀，1 g 定型產(chǎn)品相當(dāng)于 0. 7 g 濃縮液) 作為受試物，則濃縮液的日攝入量為 6. 3 g /60 kgBW，即 0. 105 g /kgBW。
1. 1. 3 試劑與儀器
戊巴比妥鈉( 北京化學(xué)試劑公司，批號： AM00469) 、巴比妥鈉( 成都康弘藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，批號： 190305) ，2 種試劑均現(xiàn)配現(xiàn)用。電子天平( 德國賽多利斯股份公司，型號： BT-124S) 、電熱蒸餾水器( 北京市永光明醫(yī)療儀器廠，型號： HS. Z68. 10) 、超聲波加濕器( 北京亞都室內(nèi)環(huán)保科技股份有限公司，型號： YC-D209) 。
1. 2 方法
1. 2. 1 分組與模型制備
分別選取 48 只體質(zhì)量為18. 7 ～ 21. 5 g 的小鼠并分為 4 組，每組 12 只，進(jìn)行直接睡眠實(shí)驗(yàn)、延長戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)、戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)和巴比妥鈉催眠潛伏期實(shí)驗(yàn)［8］。
1. 2. 2 給藥方法
以成人( 體質(zhì)量按 60 kg 計(jì)) 每天攝入濃縮液的量( 0. 105 g /kg) 的 10、20 和 30 倍設(shè)置劑量組，則羅布麻茶高劑量組、羅布麻茶中劑量組、羅布麻茶低劑量組的劑量分別為 3. 15 g /kg、2. 10 g /kg、1. 05 g /kg。精 確 稱 取 7. 88 g、5. 25 g、2. 63 g 濃縮液于 50 mL 容量中，加入蒸餾水，充分溶解后定容，陰性對照組為蒸餾水，每組 12 只。各劑量組小 鼠 每 天 灌 胃 給 予 濃 縮 液 1 次，灌 胃 量 為0. 2 mL /10 g，陰性對照組小鼠給予等體積的蒸餾水，各劑量組持續(xù)灌胃 30 d。小鼠于末次給藥前 1 d給予蒸餾水及不同濃度濃縮液 60 min 后，檢測各組小鼠自主活動(dòng) 5 min 自主活動(dòng)行為情況，動(dòng)物須在檢測開始前 2 min 放入曠場箱內(nèi)適應(yīng)后開始測試。
1. 2. 3 檢測指標(biāo)與方法
1. 2. 3. 1 直接睡眠實(shí)驗(yàn)
小鼠末次喂予蒸餾水及不同濃度樣品的受試物后，查看受試樣品組及陰性對照組有無入睡表現(xiàn)，以翻正反射消失為標(biāo)準(zhǔn)，記錄陰性對照組與受試樣品組入睡小鼠個(gè)數(shù)及入睡時(shí)間。
1. 2. 3. 2 延長戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)
正式實(shí)驗(yàn)開始前先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，找到使小鼠完全入睡，但又不會(huì)使 其 入 睡 時(shí) 間 過 長 的 戊 巴 比 妥 鈉 劑 量( 45 mg /kg) ，并以此劑量開展后面實(shí)驗(yàn)。小鼠最后1 次給予蒸餾水及不同濃度受試物后，出現(xiàn)峰作用前 15 min，給各組小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉，注射量為 0. 1 mL /10 g，以翻正反射消失為標(biāo)準(zhǔn)，查看受試樣品能否延長戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間。
1. 2. 3. 3 戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)
正式實(shí)驗(yàn)開始前先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，確定戊巴比妥鈉最大閾下催眠劑量( 26 mg /kg) ： 85% 小鼠翻正反射不消失的戊巴比妥鈉最大閾下劑量。小鼠最后 1 次給予蒸餾水及不同濃度受試樣品后，出現(xiàn)峰作用前 10 min，各組小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉最大閾下催眠劑量，注射量為 0. 1 mL /10 g，記錄 30 min 內(nèi)入睡個(gè)體數(shù)( 翻正反射消失 60 s 以上) 。
1. 2. 3. 4 巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)
正式實(shí)驗(yàn)開始前先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，確定小鼠完全入睡，但又不會(huì)使其入睡過長時(shí)間的巴比妥鈉的劑量( 260 mg /kg) ，并以此劑量開展后面實(shí)驗(yàn)。
1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
采用 SPSS 22. 0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，采用方差分析法進(jìn)行均值比較，方差齊性，各組間 比 較 用 LSD 法； 方 差 不 齊 性，各 劑 量 組 間 Tamhane，s 法比較。用方差分析小鼠體質(zhì)量、入睡時(shí)間、入睡動(dòng)物數(shù)、潛伏期的單因素實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)； 用 χ2檢驗(yàn)分析入睡動(dòng)物發(fā)生率的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。以 P ＜ 0. 05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
2. 1 羅布麻茶對小鼠體質(zhì)量的影響
小鼠最后 1次喂予蒸餾水及不同濃度受試物后，對小鼠實(shí)驗(yàn)前后體質(zhì)量進(jìn)行方差分析，結(jié)果說明，各劑量組實(shí)驗(yàn)前后小鼠體質(zhì)量與陰性對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P ＞ 0. 05) 。見表 1。小鼠最后 1 次喂予蒸餾水及不同濃度受試物后，對小鼠實(shí)驗(yàn)前后體質(zhì)量方差分析，結(jié)果說明，各劑量組實(shí)驗(yàn)前與實(shí)驗(yàn)后小鼠體質(zhì)量與陰 性 對 照 組 比 較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 ( P ＞0. 05) 。見表 2。各劑量組實(shí)驗(yàn)前后小鼠體質(zhì)量與陰性對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P ＞ 0. 05) 。見表 3。小鼠最后 1 次喂予蒸餾水及不同濃度受試物后，對小鼠實(shí)驗(yàn)前后體質(zhì)量進(jìn)行方差分析，結(jié)果說明，各劑量組實(shí)驗(yàn)前后小鼠體質(zhì)量與陰性對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P ＞ 0. 05) 。見表 4。
2. 2 羅布麻茶對直接睡眠實(shí)驗(yàn)入睡小鼠數(shù)及入睡時(shí)間的影響
與陰性對照組比較，各劑量組入睡動(dòng)物只數(shù)及入睡時(shí)間均為 0，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P ＞0. 05) 。
2. 3 羅布麻茶對戊巴比妥鈉入睡時(shí)間的影響
各組的入睡時(shí)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P ＜ 0. 05) ，與陰性對照組比較，高劑量組小鼠入睡時(shí)間顯著增長( P ＜ 0. 01 ) ，中劑量組小鼠入睡時(shí)間增長 ( P ＜0. 05) ，劑量低的觀察組小鼠入睡時(shí)間無明顯變化( P ＜ 0. 05) 。見表 5。
2. 4 羅布麻茶對戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)入睡發(fā)生率的影響
與陰性對照組比較，各劑量組小鼠的入睡發(fā)生率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P ＞ 0. 05) 。見表 6。
5 羅布麻茶對戊巴比妥鈉潛伏期的影響
與陰性對照組比較，羅布麻茶高劑量組小鼠睡眠潛伏期明顯變短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P ＜ 0. 01) ，羅布麻茶中劑量組、羅布麻茶低劑量組小鼠睡眠潛伏期差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P ＞ 0. 05) 。見表 7。
3 討論
目前，失眠已成為社會(huì)普遍現(xiàn)象，嚴(yán)重影響人們的正常生活。西醫(yī)認(rèn)為睡眠主要是因?yàn)榇竽X神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)節(jié)功能發(fā)生障礙； 中醫(yī)認(rèn)為是人體陰陽失衡。常見安眠藥的作用機(jī)制是抑制神經(jīng)系統(tǒng)，降低神經(jīng)興奮性。因此，它在幫助失眠患者改善睡眠的同時(shí)，會(huì)嚴(yán)重減低神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)功能。長期服用，易形成藥物 依 賴，甚至發(fā)生慢性中毒及戒斷綜合征等［9-13］。羅布麻茶以平肝安神，補(bǔ)腎寧心為法，選用羅布麻葉，輔以酸棗仁提取物，再配以五味子提取物共同組方，改善睡眠?，F(xiàn)代研究表明： 羅布麻葉對戊巴比妥的鎮(zhèn)靜催眠作用有協(xié)同作用； 酸棗仁具有延長大鼠慢波睡眠深睡階段的功效； 五味子能延長睡眠時(shí)間，鎮(zhèn)靜安神，同時(shí)具有提高機(jī)體免疫力的功效。羅布麻茶作為一種天然安全的保健食品不僅可以改善睡眠還不會(huì)生產(chǎn)依賴性，其中含有的黃酮類等物質(zhì)使其保健功效更為明確。
通過羅布麻茶小鼠實(shí)驗(yàn)說明，對小鼠經(jīng)口連續(xù)灌胃給予高劑量、中劑量、低劑量的羅布麻茶 30 d，與陰性對照組比較，戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠時(shí)間高劑量組顯著延長，睡眠潛伏期明顯減短； 中劑量組小鼠睡眠時(shí)間延長； 直接睡眠實(shí)驗(yàn)入睡動(dòng)物個(gè)數(shù)、睡眠時(shí)間及戊巴比妥鈉入睡發(fā)生率羅布麻茶高劑量組、羅布麻茶中劑量組、羅布麻茶低劑量組與陰性對照組比較無顯著性差異； 各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)小鼠體質(zhì)量羅布麻茶高劑量組、羅布麻茶中劑量組、羅布麻茶低劑量組與陰性對照組比較無顯著性差異，根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范》( 2003 版) 中的評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，認(rèn)為羅布麻茶具有改善睡眠的功效［14-21］。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)比較，羅布麻茶可使小鼠的體質(zhì)量有一定程度的降低，羅布麻具有清熱利尿及增加腸蠕動(dòng)的作用，進(jìn)而促進(jìn)新陳代謝，降低體質(zhì)量，引起動(dòng)物腦系數(shù)的升高，即小鼠腦組織中樞神經(jīng)遞質(zhì) 5-羥色胺、多巴胺的水平，羅布麻改善睡眠的機(jī)制可能在于促進(jìn) 5-羥色胺的生物合成過程，從而幫助患者改善睡眠［22］。
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文章摘自：何偉，王莉，劉磊，黃景鳳，李治建.羅布麻茶改善睡眠功能實(shí)驗(yàn)研究[J].世界中醫(yī)藥，2022，17(23)：3356-3359.
