摘 要： 本發(fā)明提供一種復(fù)方羅布麻顆粒中羅布麻葉和菊花的薄層鑒別方法，屬于中藥檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的薄層鑒別方法的步驟包括：S1制備供試品溶液、S2制備對(duì)照藥材溶液、S3制備混合對(duì)照品溶液和S4薄層色譜鑒別。本發(fā)明通過將環(huán)己烷、乙酸乙酯、甲酸按照體積比(6 8)：(4 6)：(0.6 1)混合作為展開劑，點(diǎn)樣于同一塊薄層板上，以體積濃度為1％的三氯化鋁乙醇溶液為顯色劑，一次鑒別試驗(yàn)即可同時(shí)鑒別復(fù)方羅布麻顆粒中的羅布麻葉、菊花兩個(gè)藥味，反映這兩個(gè)藥味的質(zhì)量信息，斑點(diǎn)清晰，專屬性強(qiáng)，耐用性好，鑒別更全面，更有利于控制復(fù)方羅布麻顆粒的質(zhì)量，且減少了薄層鑒別的試驗(yàn)次數(shù)，減少試劑用量，節(jié)省時(shí)間，提高了檢驗(yàn)效率。
權(quán)利要求書
1.一種復(fù)方羅布麻顆粒中羅布麻葉和菊花的薄層鑒別方法，其特征在于，包括如下步驟：
S1、制備供試品溶液：稱取復(fù)方羅布麻顆粒，研細(xì)，加入稀鹽酸、乙酸乙酯，超聲處理，過濾，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙猓吹霉┰嚻啡芤海?/span>
S2、制備對(duì)照藥材溶液：稱取羅布麻葉對(duì)照藥材、菊花對(duì)照藥材，分別加熱，濾過，濾液蒸干后，分別加入稀鹽酸和乙酸乙酯，超聲處理，過濾，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙猓吹昧_布麻葉對(duì)照藥材溶液和菊花對(duì)照藥材溶液；
S3、制備混合對(duì)照品溶液：稱取槲皮素對(duì)照品、山柰素對(duì)照品，加乙醇混合，制成槲皮素、山柰素混合對(duì)照品溶液；
S4、薄層色譜鑒別：吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液和對(duì)照品溶液，分別點(diǎn)于薄層板上，加入展開劑，展開，取出，晾干，噴顯色劑，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，檢視，在供試品色譜中，在與槲皮素、山柰素對(duì)照品色譜和羅布麻葉對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn)，在與菊花對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)方羅布麻顆粒中羅布麻葉和菊花的薄層鑒別方法，其特征在于，所述步驟S1中，稱取復(fù)方羅布麻顆粒2.5g，研細(xì)，加稀鹽酸1ml與乙酸乙酯25ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)方羅布麻顆粒中羅布麻葉和菊花的薄層鑒別方法，其特征在于，所述步驟S2中，稱取羅布麻葉對(duì)照藥材、菊花對(duì)照藥材各1g，分別加熱水25ml超聲30分鐘，濾過，濾液蒸干后，分別加稀鹽酸1ml與乙酸乙酯25ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，分別作為羅布麻葉對(duì)照藥材溶液、菊花對(duì)照藥材溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)方羅布麻顆粒中羅布麻葉和菊花的薄層鑒別方法，其特征在于，所述步驟S3中的混合對(duì)照品溶液濃度為每1ml各含0.5mg的槲皮素、山柰素。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)方羅布麻顆粒中羅布麻葉和菊花的薄層鑒別方法，其特征在于，所述步驟S4中吸取供試品溶液的量為5～10μl，對(duì)照藥材溶液的量為5μl，對(duì)照品溶液的量為3μl。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)方羅布麻顆粒中羅布麻葉和菊花的薄層鑒別方法，其特征在于，所述薄層板為同一塊硅膠G薄層板。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)方羅布麻顆粒中羅布麻葉和菊花的薄層鑒別方法，其特征在于，所述顯色劑為體積濃度為1％的三氯化鋁乙醇溶液。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)方羅布麻顆粒中羅布麻葉和菊花的薄層鑒別方法，其特征在于，所述步驟S4中的展開劑由環(huán)己烷、乙酸乙酯、甲酸按照體積比(6 8)：(4 6)：(0.6 1)混合而成。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的復(fù)方羅布麻顆粒中羅布麻葉和菊花的薄層鑒別方法，其特征在于，所述展開劑由環(huán)己烷、乙酸乙酯、甲酸按照體積比7：5：0.8混合而成。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)方羅布麻顆粒中羅布麻葉和菊花的薄層鑒別方法，其特征在于，所述步驟S4中的檢視為分別在日光和365nm紫外光下檢視。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及中藥檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體是涉及一種復(fù)方羅布麻顆粒中羅布麻葉和菊花的薄層鑒別方法。
背景技術(shù)
中藥飲片是中國(guó)中藥產(chǎn)業(yè)不可缺失的部分，是中醫(yī)臨床辨證施治必需的傳統(tǒng)武器，其品質(zhì)直接影響中醫(yī)臨床防病、治病的療效。復(fù)方制劑復(fù)方羅布麻顆粒是由羅布麻葉、山楂、菊花三味藥材經(jīng)提取制備而成，具有清熱，平肝，安神的功效，用于高血壓、神經(jīng)衰弱引起的頭暈，心悸，失眠等癥。復(fù)方羅布麻顆粒劑經(jīng)溶解后口服給藥，產(chǎn)品具有劑量準(zhǔn)確、溶解迅速、便于吸收、起效快、口感好、攜帶保存方便、服用量小、性質(zhì)穩(wěn)定等特點(diǎn)。其中，羅布麻葉為夾竹桃科植物羅布麻的葉，夏季采收，除去雜質(zhì)，干燥，用于肝火熾盛之頭痛眩暈、驚風(fēng)抽搐，有降低血壓的作用。目前對(duì)于羅布麻葉配方顆粒的定性研究文獻(xiàn)較為缺少，對(duì)羅布麻葉配方顆粒質(zhì)量監(jiān)控困難。國(guó)家藥典委員會(huì)于2013 08 13公示了“關(guān)于2010年版《中國(guó)藥典》(一部)增補(bǔ)本品種及藥品標(biāo)準(zhǔn)提高修訂公示”附件24復(fù)方羅布麻顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)公示稿，對(duì)該品種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了提高，但至今2020年版《中國(guó)藥典》仍未收錄該品種。該品種2013年藥典公示標(biāo)準(zhǔn)中，羅布麻葉薄層鑒別方法包括羅布麻葉對(duì)照藥材鑒別和槲皮素、山柰素鑒別，菊花鑒別方法包括菊花對(duì)照藥材、綠原酸鑒別，2味藥材3個(gè)鑒別方法，難以達(dá)到簡(jiǎn)單、快速鑒別中藥制劑中的成分。
中國(guó)專利文獻(xiàn)CN101269158A公開了一種治療高血壓的藥物組合物及制備方法和檢測(cè)方法，該藥物組合物原料藥組成為：羅布麻、夏枯草、鉤藤、澤瀉、珍珠母、牛膝、山楂和菊花。該發(fā)明通過對(duì)夏枯草、羅布麻的鑒別對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)量進(jìn)行控制，是通過吸取供試品溶液10μl、對(duì)照藥材溶液5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿、甲醇、水、甲酸按照體積比9∶2.5∶0.1∶0.2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鋁乙醇溶液，于100℃加熱10分鐘；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。中國(guó)專利文獻(xiàn)CN101669977A公開了一種羅布麻葉膠囊的質(zhì)量檢測(cè)方法，采用的薄層色譜鑒別條件為：吸取供試品溶液和對(duì)照藥材溶液各5ul，分別點(diǎn)于同一硅膠薄層板上，以三氯甲烷：甲醇：水：甲酸＝9：2.5：0.1：0.2(體積比)的溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積濃度1％三氯化鋁乙醇溶液，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜對(duì)應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。這些現(xiàn)有技術(shù)中對(duì)復(fù)方羅布麻顆粒的薄層色譜鑒別方法，均采用單個(gè)中藥材成分進(jìn)行鑒別，難以采用相同的方法同時(shí)對(duì)復(fù)方羅布麻顆粒中多個(gè)中藥成分進(jìn)行鑒別，因此建立一種快速、簡(jiǎn)便的鑒別復(fù)方羅布麻顆粒中的多味中藥成分，對(duì)于全面科學(xué)鑒定復(fù)方羅布麻顆粒的質(zhì)量有重要意義。
發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供了一種復(fù)方羅布麻顆粒中羅布麻葉和菊花的薄層鑒別方法，該方法斑點(diǎn)清晰、專屬性強(qiáng)、耐用性好；一次鑒別試驗(yàn)即可反映二個(gè)藥味羅布麻葉和菊花的質(zhì)量信息，鑒別更全面，更有利于控制復(fù)方羅布麻顆粒的質(zhì)量，且減少了薄層鑒別的試驗(yàn)次數(shù)，減少試劑用量，節(jié)省時(shí)間，提高了檢驗(yàn)效率。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種復(fù)方羅布麻顆粒中羅布麻葉和菊花的薄層鑒別方法，包括如下步驟：
S1、制備供試品溶液：稱取復(fù)方羅布麻顆粒，研細(xì)，加入稀鹽酸、乙酸乙酯，超聲處理，過濾，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，即得供試品溶液?/span>
S2、制備對(duì)照藥材溶液：稱取羅布麻葉對(duì)照藥材、菊花對(duì)照藥材，分別加熱，濾過，濾液蒸干后，分別加入稀鹽酸和乙酸乙酯，超聲處理，過濾，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，即得羅布麻葉對(duì)照藥材溶液和菊花對(duì)照藥材溶液；
S3、制備混合對(duì)照品溶液：稱取槲皮素對(duì)照品、山柰素對(duì)照品，加乙醇混合，制成槲皮素、山柰素混合對(duì)照品溶液；
S4、薄層色譜鑒別：吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液和對(duì)照品溶液，分別點(diǎn)于薄層板上，加入展開劑，展開，取出，晾干，噴顯色劑，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，檢視，在供試品色譜中，在與槲皮素、山柰素對(duì)照品色譜和羅布麻葉對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn)，在與菊花對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
進(jìn)一步的，所述復(fù)方羅布麻顆粒為無蔗糖的復(fù)方羅布麻顆粒。
進(jìn)一步的，所述步驟S1中，稱取復(fù)方羅布麻顆粒2.5g，研細(xì)，加稀鹽酸1ml與乙酸乙酯25ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。
進(jìn)一步的，所述步驟S2中，稱取羅布麻葉對(duì)照藥材、菊花對(duì)照藥材各1g，分別加熱水25ml超聲30分鐘，濾過，濾液蒸干后，分別加稀鹽酸1ml與乙酸乙酯25ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，分別作為羅布麻葉對(duì)照藥材溶液、菊花對(duì)照藥材溶液。
進(jìn)一步的，所述步驟S3中的混合對(duì)照品溶液濃度為每1ml各含0.5mg的槲皮素、山柰素。
進(jìn)一步的，所述步驟S4中吸取供試品溶液的量為5～10μl，對(duì)照藥材溶液的量為5μl，對(duì)照品溶液的量為3μl。
進(jìn)一步的，所述薄層板為同一塊硅膠G薄層板。
進(jìn)一步的，所述顯色劑為體積濃度為1％的三氯化鋁乙醇溶液。
進(jìn)一步的，所述步驟S4中的展開劑由環(huán)己烷、乙酸乙酯、甲酸按照體積比(6 8)：(4 6)：(0.6 1)混合而成。
更進(jìn)一步的，所述展開劑由環(huán)己烷、乙酸乙酯、甲酸按照體積比7：5：0.8混合而成。
進(jìn)一步的，所述步驟S4中的檢視為分別在日光和365nm紫外光下檢視。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明提供的復(fù)方羅布麻顆粒中羅布麻葉和菊花的薄層鑒別方法，斑點(diǎn)清晰、專屬性強(qiáng)、耐用性好，不受薄層板廠家、溫度、相對(duì)濕度等的影響，無論是在日光下還是365nm紫外光下檢視，一次鑒別試驗(yàn)即可反映二個(gè)藥味羅布麻葉和菊花的質(zhì)量信息，鑒別更全面，更有利于控制復(fù)方羅布麻顆粒的質(zhì)量，且減少了薄層鑒別的試驗(yàn)次數(shù)，減少試劑用量，節(jié)省時(shí)間，提高了檢驗(yàn)效率。
附圖說明
圖1為實(shí)施例1的薄層色譜圖；
圖2為實(shí)施例2的薄層色譜圖；
圖3為實(shí)施例3的薄層色譜圖；
圖4為不同薄層板考察中，采用Merk硅膠G板作為薄層板進(jìn)行薄層鑒別得到的薄層色譜圖；
圖5為不同薄層板考察中，采用煙臺(tái)銀龍硅膠HSG板作為薄層板進(jìn)行薄層鑒別得到的薄層色譜圖；
圖6為不同相對(duì)濕度考察中，相對(duì)濕度為23％時(shí)的薄層色譜圖；
圖7為不同相對(duì)濕度考察中，相對(duì)濕度為60％時(shí)的薄層色譜圖；
圖8為不同相對(duì)濕度考察中，相對(duì)濕度為90％時(shí)的薄層色譜圖；
圖9為不同溫度考察中，溫度為3.8℃時(shí)的薄層色譜圖；
圖10為不同溫度考察中，溫度為20.2℃時(shí)的薄層色譜圖；
圖11為不同溫度考察中，溫度為30℃時(shí)的薄層色譜圖；
圖12為對(duì)比例1的薄層色譜圖；
圖13為對(duì)比例2的薄層色譜圖。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。實(shí)施例中所用到的各種常用化學(xué)試劑，均為市售產(chǎn)品。除非另有定義，本發(fā)明所使用的所有的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)與屬于本發(fā)明的技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員通常理解的含義相同。本發(fā)明的說明書中所使用的術(shù)語(yǔ)只是為了描述具體的實(shí)施例的目的，不用于限制本發(fā)明。
為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚明了，下面結(jié)合具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)該理解，這些描述只是示例性的，而并非要限制本發(fā)明的范圍。此外，在以下說明中，省略了對(duì)公知結(jié)構(gòu)和技術(shù)的描述，以避免不必要地混淆本發(fā)明的概念。
實(shí)施例1、本發(fā)明的復(fù)方羅布麻顆粒的羅布麻葉、菊花薄層鑒別
S1、制備供試品溶液：稱取復(fù)方羅布麻顆粒(無蔗糖)2.5g，研細(xì)，加稀鹽酸1ml與乙酸乙酯25ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液，重復(fù)操作3次，共制備3批復(fù)方羅布麻顆粒供試品，編號(hào)分別為：KC220905、KC220906、KC221004；
S2、制備對(duì)照藥材溶液：稱取羅布麻葉對(duì)照藥材、菊花對(duì)照藥材各1g，分別加熱水25ml超聲30分鐘，濾過，濾液蒸干后，分別加稀鹽酸1ml與乙酸乙酯25ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，分別作為羅布麻葉對(duì)照藥材溶液、菊花對(duì)照藥材溶液；
S3、制備混合對(duì)照品溶液：稱取槲皮素對(duì)照品、山柰素對(duì)照品，加乙醇制成每1ml各含0.5mg槲皮素、山柰素的混合溶液，作為槲皮素、山柰素混合對(duì)照品溶液；
S4、薄層色譜鑒別：吸取3批復(fù)方羅布麻顆粒供試品溶液各5～10μl，對(duì)照藥材溶液各5μl，對(duì)照品溶液各3μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷、乙酸乙酯、甲酸按照體積比7：5：0.8為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積濃度為1％的三氯化鋁乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，分別在日光和365nm紫外光下檢視，得到的薄層色譜圖參見附圖1，圖1左邊圖是紫外光下檢視得到的薄層色譜圖，圖1右邊圖是日光下檢視得到的薄層色譜圖，無論是日光還是365nm紫外光下，3批復(fù)方羅布麻顆粒供試品色譜在與槲皮素、山柰素對(duì)照品色譜和羅布麻葉對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn)，且羅布麻葉陰性顆粒和空白顆粒無干擾；3批復(fù)方羅布麻顆粒供試品色譜在與菊花對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，且菊花陰性顆粒和空白顆粒無干擾。
實(shí)施例2、本發(fā)明的復(fù)方羅布麻顆粒中羅布麻葉和菊花的薄層鑒別方法
S1、制備供試品溶液：稱取復(fù)方羅布麻顆粒(無蔗糖)2.5g，研細(xì)，加稀鹽酸1ml與乙酸乙酯25ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液，重復(fù)操作6次，共制備6批復(fù)方羅布麻顆粒供試品，編號(hào)分別為：KC220907、KC220908、KC220909、KC220910、KC220911、KC220912；
S2、制備對(duì)照藥材溶液：稱取羅布麻葉對(duì)照藥材、菊花對(duì)照藥材各1g，分別加熱水25ml超聲30分鐘，濾過，濾液蒸干后，分別加稀鹽酸1ml與乙酸乙酯25ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，分別作為羅布麻葉對(duì)照藥材溶液、菊花對(duì)照藥材溶液；
S3、制備混合對(duì)照品溶液：再取槲皮素對(duì)照品、山柰素對(duì)照品，加乙醇制成每1ml各含0.5mg槲皮素、山柰素的混合溶液，作為槲皮素、山柰素混合對(duì)照品溶液；
S4、薄層色譜鑒別：吸取6批供試品溶液各5～10μl，對(duì)照藥材溶液各5μl，對(duì)照品溶液各3μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷、乙酸乙酯甲酸按照體積比7：5：0.8為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積濃度為1％的三氯化鋁乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，分別在日光和365nm紫外光下檢視，得到的薄層色譜圖參見附圖2，圖2左邊圖是紫外光下檢視得到的薄層色譜圖，圖2右邊圖是日光下檢視得到的薄層色譜圖，無論是日光還是365nm紫外光下，6批復(fù)方羅布麻顆粒供試品色譜在與槲皮素、山柰素對(duì)照品色譜和羅布麻葉對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn)，且羅布麻葉陰性顆粒和空白顆粒無干擾；6批復(fù)方羅布麻顆粒供試品色譜在與菊花對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，且菊花陰性顆粒和空白顆粒無干擾。
實(shí)施例3、本發(fā)明的復(fù)方羅布麻顆粒的羅布麻葉、菊花薄層鑒別
S1、制備供試品溶液：稱取復(fù)方羅布麻顆粒(無蔗糖)2.5g，研細(xì)，加稀鹽酸1ml與乙酸乙酯25ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液，重復(fù)操作6次，共制備6批復(fù)方羅布麻顆粒供試品，編號(hào)分別為：KC221001、KC221002、KC221003、KC221005、KC221006、KC221007；
S2、制備對(duì)照藥材溶液：稱取羅布麻葉對(duì)照藥材、菊花對(duì)照藥材各1g，分別加熱水25ml超聲30分鐘，濾過，濾液蒸干后，分別加稀鹽酸1ml與乙酸乙酯25ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，分別作為羅布麻葉對(duì)照藥材溶液、菊花對(duì)照藥材溶液；
S3、制備混合對(duì)照品溶液：稱取槲皮素對(duì)照品、山柰素對(duì)照品，加乙醇制成每1ml各含0.5mg槲皮素、山柰素的混合溶液，作為槲皮素、山柰素混合對(duì)照品溶液；
S4、薄層色譜鑒別：吸取6批供試品溶液各5～10μl，對(duì)照藥材溶液各5μl，對(duì)照品溶液各3μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷、乙酸乙酯、甲酸按照體積比7：5：0.8為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積濃度為1％的三氯化鋁乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，分別在日光和365nm紫外光下檢視，得到的薄層色譜圖參見附圖3，圖3左邊圖是紫外光下檢視得到的薄層色譜圖，圖3右邊圖是日光下檢視得到的薄層色譜圖，無論是日光還是365nm紫外光下，6批復(fù)方羅布麻顆粒供試品色譜在與槲皮素、山柰素對(duì)照品色譜和羅布麻葉對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn)，且羅布麻葉陰性顆粒和空白顆粒無干擾；6批復(fù)方羅布麻顆粒供試品色譜在與菊花對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，且菊花陰性顆粒和空白顆粒無干擾。
對(duì)比例1
S1、制備供試品溶液：稱取復(fù)方羅布麻顆粒(無蔗糖)5g，研細(xì)，加乙酸乙酯100ml，加熱回流1小時(shí)，濾過，濾液置分液漏斗中，用水洗滌2次，每次15ml，棄去洗滌液，乙酸乙酯層加無水硫酸鈉5g脫水，靜置，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液，重復(fù)操作3次，得到3批復(fù)方羅布麻顆粒溶液，編號(hào)為KC220601、KC220701、KC220702；
S2、制備對(duì)照藥材溶液：稱取羅布麻葉對(duì)照藥材1g，加乙酸乙酯20ml，加熱回流1小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液；
S3、水提法制備對(duì)照藥材溶液：取羅布麻葉對(duì)照藥材0.5g，加水25ml，加熱回流1小時(shí)，放冷，濾過，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為羅布麻葉對(duì)照藥材(水提)；
S4、薄層色譜檢測(cè)：吸取上述3批供試品溶液各5 10ul，對(duì)照藥材溶液10ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，將三氯甲烷、甲醇、水和甲酸按照體積比9：2.5：0.1：0.2混合作為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積濃度為1％的三氯化鋁乙醇溶液，在105℃加熱數(shù)分鐘，置365nm紫外光燈下檢視，得到的薄層色譜圖參見附圖12，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，但羅布麻葉空白顆粒存在陰性干擾，對(duì)照藥材與樣品對(duì)應(yīng)性也稍差。
對(duì)比例2
S1、制備供試品溶液：稱取復(fù)方羅布麻顆粒(無蔗糖)5g，研細(xì)，加稀鹽酸2ml與乙酸乙酯50ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液，編號(hào)KC220703；
S2、制備對(duì)照藥材溶液：取菊花對(duì)照藥材1g，加稀鹽酸1ml與乙酸乙酯50ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液；
S3、制備對(duì)照品溶液：另取綠原酸對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；
S4、照薄層色譜試驗(yàn)：吸取供試品溶液及上述對(duì)照品和對(duì)照藥材溶液各0.5 1ul，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯、乙酸乙酯、甲酸、冰醋酸和水按照體積比1：15：1：1：2混合的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，在365nm紫外光下檢視，得到的薄層色譜圖參見附圖13，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，但菊花對(duì)照藥材與復(fù)方羅布麻顆粒供試品對(duì)應(yīng)性差，且有陰性干擾，綠原酸對(duì)照品也有陰性干擾。
試驗(yàn)例：方法學(xué)考察
1、專屬性考察
本發(fā)明實(shí)施例1 3對(duì)15批復(fù)方羅布麻顆粒供試品進(jìn)行了薄層色譜鑒別，得到的薄層色譜圖參見附圖1 3，無論是日光還是365nm紫外光下，15批復(fù)方羅布麻顆粒供試品色譜在與槲皮素、山柰素對(duì)照品色譜和羅布麻葉對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn)，且羅布麻葉陰性顆粒和空白顆粒無干擾；15批復(fù)方羅布麻顆粒供試品色譜在與菊花對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，且菊花陰性顆粒和空白顆粒無干擾，且斑點(diǎn)清晰，說明本發(fā)明的薄層方法專屬性好，可同時(shí)鑒別復(fù)方羅布麻顆粒中的羅布麻葉和菊花；而對(duì)比例1 2按照2013年《中國(guó)藥典》公示的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行薄層色譜鑒別，薄層色譜圖參見附圖12 13，發(fā)現(xiàn)該標(biāo)準(zhǔn)羅布麻葉對(duì)照藥材鑒別存在陰性干擾，專屬性差，菊花對(duì)照藥材、綠原酸鑒別也存在陰性干擾，專屬性差，該公示標(biāo)準(zhǔn)難以準(zhǔn)確地鑒別復(fù)方羅布麻顆粒(無蔗糖)的成分。
2、耐用性考察
(1)不同薄層板考察
在相同溫度20.8℃和相同相對(duì)濕度33％下，使用不同廠家的硅G薄層板對(duì)實(shí)施例1所得的3批復(fù)方羅布麻顆粒供試品溶液KC220905、KC220906、KC221004進(jìn)行薄層鑒別，所得薄層色譜圖參見附圖4 5，圖4為采用Merk硅膠G板作為薄層板，圖5為采用煙臺(tái)銀龍硅膠HSG板作為薄層板，圖4、圖5中的左邊圖是紫外光下得到的薄層色譜圖、右邊圖是日光下得到的薄層色譜圖，無論是日光還是365nm紫外光下，3批復(fù)方羅布麻顆粒供試品色譜在與槲皮素、山柰素對(duì)照品色譜和羅布麻葉對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn)，且羅布麻葉陰性顆粒和空白顆粒無干擾；3批復(fù)方羅布麻顆粒供試品色譜在與菊花對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，且菊花陰性顆粒和空白顆粒無干擾，且斑點(diǎn)清晰明亮，無顯著變化，說明本發(fā)明提供的薄層鑒別方法適用于不同廠家的硅膠G薄層板，耐用性良好。
(2)不同相對(duì)濕度考察
在相同溫度5.6℃，在不同相對(duì)濕度23％、60％、90％對(duì)實(shí)施例1所得的3批復(fù)方羅布麻顆粒供試品溶液KC220905、KC220906、KC221004進(jìn)行薄層鑒別，薄層板為Merk硅膠G板，所得薄層色譜圖參見附圖6 8，圖6為相對(duì)濕度23％，圖7為相對(duì)濕度60％，圖8為相對(duì)濕度90％，圖6、圖7、圖8中左邊圖是紫外光下得到的薄層色譜圖、右邊圖是日光下得到的薄層色譜圖，無論是日光還是365nm紫外光下，3批復(fù)方羅布麻顆粒供試品色譜在與槲皮素、山柰素對(duì)照品色譜和羅布麻葉對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn)，且羅布麻葉陰性顆粒和空白顆粒無干擾；3批復(fù)方羅布麻顆粒供試品色譜在與菊花對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，且菊花陰性顆粒和空白顆粒無干擾，斑點(diǎn)清晰明亮，無顯著影響，說明本發(fā)明的薄層鑒別方法對(duì)不同相對(duì)濕度的耐用性良好。
(3)不同溫度考察
在相同相對(duì)濕度32％下，不同溫度3.8℃、20.2℃、30℃對(duì)實(shí)施例1所得的3批復(fù)方羅布麻顆粒供試品溶液KC220905、KC220906、KC221004進(jìn)行羅布麻葉、菊花薄層鑒別，薄層板為Merk硅膠G板，所得薄層色譜圖參見附圖9 11，圖9為溫度3.8℃，圖10為溫度20.2℃，圖11為30℃，圖9、圖10、圖11中左邊圖是紫外光下得到的薄層色譜圖、右邊圖是日光下得到的薄層色譜圖，無論是日光還是365nm紫外光下，3批復(fù)方羅布麻顆粒供試品色譜在與槲皮素、山柰素對(duì)照品色譜和羅布麻葉對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn)，且羅布麻葉陰性顆粒和空白顆粒無干擾；3批復(fù)方羅布麻顆粒供試品色譜在與菊花對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，且菊花陰性顆粒和空白顆粒無干擾斑點(diǎn)清晰明亮，無顯著影響，說明本發(fā)明的薄層鑒別方法對(duì)不同溫度的耐用性良好。
以上實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。
摘自國(guó)家發(fā)明專利，發(fā)明人：傅詠梅，盧偉玲，王歡，黃后楷，車軫潮，陳靜，梁硯康，鄧習(xí)燕，申請(qǐng)?zhí)枺?/font>202310163265.2，申請(qǐng)日：2023.02.23
