細胞膜具有維持細胞完整性和功能的作用。因其富含飽和脂肪酸最易受自由基攻擊，自由基對細胞膜的損傷主要是產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，從而引起膜結(jié)構(gòu)和功能的改變。因此，抗氧化劑可有效地防止自由基對細胞膜脂質(zhì)的過氧化損傷。羅布麻屬于夾竹桃科植物(Apocynum vene—turn)，又名紅麻，是生長在鹽鹼沙荒地區(qū)的野生植物，我國羅布麻的資源非常豐富，分布范圍小，用羅布麻作茶飲及藥用有悠久的歷史?，F(xiàn)代研究認為其可預(yù)防和治療老年高血壓、感冒、氣管炎，對增強機體抗病能力均有一定的作用。羅布麻提取物的主要成分為黃酮類化合物0 ，而黃酮類化合物由于含有還原性酚羥基，可直接清除氧自由基，抑制脂質(zhì)過氧化。本文觀察了羅布麻提取物對體外黃嘌呤一黃嘌呤氧化酶、過氧化氫(H O )和uV照射等三種自由基產(chǎn)生體系誘導(dǎo)細胞膜脂質(zhì)過氧化的影響，報道如下：
1 儀器與材料
1．1 藥物與試劑 羅布麻葉購自武漢市藥材公司，經(jīng)鑒定為Folium apocyni Veneti。黃嘌呤(Xan)和黃嘌呤氧化酶(XO)為Sigma公司產(chǎn)品，考馬斯亮藍蛋白測定試劑盒和丙二醛(MDA)測定試劑盒購于南京建成生物工程研究所，其他試劑均為國產(chǎn)分析純。
1．2 動物大白兔購于華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院動物實驗室
1．3 儀器 uV一2201紫外分光光度計(日本島津)、高速冷凍離心機(Sigma公司)
1．4 實驗藥物的制備 羅布麻葉
2 方法與結(jié)果
2．1 方法
2．1．1 紅細胞膜的制備兔全血在0～4 oC用低滲溶血法 制備，膜蛋白含量用考馬斯亮藍試劑盒測定，得膜蛋白濃度0．
2．1．2 Xan—XO體系誘導(dǎo)細胞膜脂質(zhì)過氧化各取細胞膜懸液(0．
2．1．3 H 0 誘導(dǎo)細胞膜脂質(zhì)過氧化 以2 mol／LH 0 (終濃度為18 mmol／L)代替Xan—XO，用pH7．8磷酸鹽緩沖液補充反應(yīng)體系的體積至1．0mL，其余條件同“2．1．
2．1．4 uV照射誘導(dǎo)細胞膜脂質(zhì)過氧化 反應(yīng)終體積為1 mL，內(nèi)含細胞膜0．5 mL及不同濃度的藥物或等體積的磷酸鹽緩沖液，反應(yīng)管置紫外燈下照射1 h后待測。
2．1．5 脂質(zhì)過氧化物的檢測采用MDA試劑盒測定，測定過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物中的丙二醛(MDA)含量以反映脂質(zhì)過氧化程度。以下式計算羅布麻對反應(yīng)體系誘導(dǎo)MDA生成的抑制率：抑制率=籍x 100對照組 MDA 含量一正常組 MDA 含量 ％
2．1．6 統(tǒng)計學(xué)處理MDA數(shù)值采用S的形式，多組資料間的兩兩比較用t檢驗，P<0．05認為有顯著性差異。
2．2 結(jié)果
2．2．1 羅布麻醇提物對Xan—XO體系誘導(dǎo)細胞膜脂質(zhì)過氧化生成的影響 結(jié)果表明，Xan—XO系統(tǒng)可誘導(dǎo)細胞膜發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，使對照組的MDA含量明顯升高(P<0．001)；四個羅布麻組的MDA值較對照組均有顯著下降，并有一定的劑量依賴關(guān)系(P<0．001，P<0．01)。見表1。
2．2．2 羅布麻醇提物對H 0 誘導(dǎo)細胞膜脂質(zhì)過氧化生成的影響結(jié)果表明，H 0 可誘導(dǎo)細胞膜脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，使對照組的MDA含量明顯升高(P<0．001)；四個羅布麻組的MDA值較對照組均有顯著下降，并有一定的劑量依賴關(guān)系(P<0．001，P<0．01)。見表2。
2．2．3 羅布麻醇提物對uV照射誘導(dǎo)細胞膜脂質(zhì)過氧化生成的影響 結(jié)果表明，uV照射可誘導(dǎo)細胞膜脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，使對照組的MDA含量明顯升高(P<0．001)；四個羅布麻組的MDA值較對照組均有顯著下降，并有一定的劑量依賴關(guān)系(P<0．01)。見表3
3 討論
3．1 自由基學(xué)說認為，自由基產(chǎn)生于細胞和組織的氧化代謝反應(yīng)過程中，自由基的不可逆累積可導(dǎo)致諸多損害，引發(fā)許多病變，其中一個重要危害主要表現(xiàn)在活性氧自由基能攻擊生物膜上的多不飽和脂肪(PUFA)，引發(fā)膜脂質(zhì)過氧化鏈式反應(yīng)(chainreaction)，導(dǎo)致自由基的擴增和膜脂質(zhì)過氧化(LPO)加深，過氧化脂質(zhì)(LPO)經(jīng)過氧化物酶分解，生成丙二醛(MDA)，MDA與蛋白質(zhì)、肽類或脂類聚合、交聯(lián)形成脂褐質(zhì)，從而引起膜結(jié)構(gòu)和功能的改變。因此，抗氧化劑可能有效地防止自由基對細胞膜脂質(zhì)的過氧化損傷。
3．2 本實驗為了觀察羅布麻醇提物抗細胞膜脂質(zhì)過氧化的作用，采用了三種損傷體系 ]，分別通過不同的機制產(chǎn)生自由基。在Xan—XO系統(tǒng)種，Xan在XO的催化下產(chǎn)生了超氧陰離子自由基(O 。：Xan+20 +H O尿酸+O 一+2H ，近年有學(xué)者應(yīng)用電子順磁共振(ERS)技術(shù)檢測到該體系有O， 生成。H O 與O2。一樣，也是組織氧化代謝的異常產(chǎn)物，當(dāng)組織中H，O 增多時，通過Fenton反應(yīng)，與組織中微量的Fe 作用生成毒性更大的羥自由基(·OH)。紫外線照射可使細胞膜懸液中的H 0 、0 和其他生物分子中的電子從低能軌道躍遷到高能軌道，稱為激發(fā)態(tài)分子，后者迅速分解成·OH、0， 和生物分子自由基。這些外源性自由基可引起細胞膜脂質(zhì)過氧化，生成的過氧化脂質(zhì)能與含游離氨基酸的蛋白質(zhì)及核酸等生物大分子形成Schif堿，從而使生物分子之間發(fā)生交聯(lián)，蛋白質(zhì)變性，造成膜功能的損傷。
3．3 羅布麻醇提物可顯著抑制這三種自由基體系誘發(fā)的紅細胞膜MDA生成，提示該藥通過阻斷自由基形成或直接清除自由基來減輕脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，這一作用可能與其分子中含有游離酚羥基有關(guān)。已知黃酮類化合物，由于含有酚羥基，在細胞膜發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)時，本身可脫氫氧化，提供電子給自由基，從而有效地中止自由基的連鎖反應(yīng)。
3．4 本文的3個損傷體系的自由基種類和損傷機制有一定的差異，但羅布麻醇提物均能抑制脂質(zhì)過氧化的形成，說明它的保護機制是多途徑的，是非特異性的自由基清除劑，其確切機理有待進一步研究。
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