摘 要：工業(yè)大麻為雌雄異株植株，少數(shù)為雌雄同株，其性別表達(dá)影響著工業(yè)大麻纖維和藥用產(chǎn)量等經(jīng)濟(jì)價(jià)值。因此，為建立工業(yè)大麻早期性別快速篩選及鑒定的方法，研究利用InDel標(biāo)記篩選出與工業(yè)大麻性別連鎖的兩組標(biāo)記物(Is-02和Is-08),將其PCR產(chǎn)物通過聚丙烯酰胺電泳和1%瓊脂糖凝膠電泳后，發(fā)現(xiàn)兩組標(biāo)記物分別在多個(gè)大麻種質(zhì)中擴(kuò)增出(370bp或272bp)雌性單一帶型，雄性中呈現(xiàn)雙帶型(370bp和199bp,272bp和100bp),且?guī)颓逦?，重?fù)性好，準(zhǔn)確性高；在大麻雌雄異株種質(zhì)、全雌品系和雌雄同株種質(zhì)中都得到了驗(yàn)證，檢測準(zhǔn)確性可達(dá)100%。結(jié)果表明，Is-02和Is-08適用于工業(yè)大麻幼苗期未知性別、花期已知性別植株及品種的快速鑒定。研究可為工業(yè)大麻早期性別鑒定提供技術(shù)支持，也為工業(yè)大麻分子標(biāo)記輔助育種提供新的分子標(biāo)記手段。
關(guān)鍵詞：工業(yè)大麻；性別連鎖；InDel標(biāo)記；性別鑒定
大麻(Cannabis sativa L.)又稱漢麻、火麻、線麻，是大麻科(Cannabinaceae)大麻屬(Cannabis)一年生草本植物。大麻是二倍體(2n=20)雙子葉植物，也是世界上最早和最廣泛種植的作物之一，其根、莖、葉、花和果實(shí)都具有重要的經(jīng)濟(jì)利用價(jià)值，在纖維、油料、藥物和特殊材質(zhì)等領(lǐng)域都有廣泛應(yīng)用[1,2]。大麻的花葉中富含大麻二酚(Cannabidiol, CBD),可應(yīng)用于藥物和化妝品等領(lǐng)域；莖稈纖維具有吸濕透氣、抗靜電和抑菌的特點(diǎn)，常用于紡織業(yè)；桿芯可用于造紙、建筑材料、活性炭及新型材料等；籽粒富含膳食纖維以及人體必需氨基酸和脂肪酸，常用于功能飲料和食品的開發(fā)[3,4,5,6]。
大麻多為雌雄異株，少數(shù)為雌雄同株，其雌雄比例接近1∶1,而不同性別大麻植株在生長發(fā)育性狀、成熟期及纖維品質(zhì)上有各自的特點(diǎn)。雄性植株的纖維質(zhì)量比雌株好，若作為纖維用，則需擴(kuò)大雄性群體比例；而雌性植株的大麻素(CBD)含量比雄株高，若以提取大麻素(CBD)和收獲種子為目的，則需擴(kuò)大雌性群體比例[6]。不同性別的大麻成熟期不一致，不利于機(jī)械收割，增加了人工成本。雌雄同株大麻則成熟期一致，利于機(jī)械收割，但易受外界環(huán)境因素影響而使性別雌化或雄化。大麻性別在種子和幼苗期尚無準(zhǔn)確鑒定的方法，在生產(chǎn)過程中，其性別表達(dá)常受到溫度、濕度、激素、重金屬鹽、光周期和栽培條件等影響，只有在生殖器官(花器官)原基形成時(shí)才能從形態(tài)上準(zhǔn)確判斷植株性別，但雄性植株在開花后自然死亡，造成極大的生產(chǎn)損失[7]。因此，通過分子標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行早期性別鑒定，克服環(huán)境因素對(duì)形態(tài)和生理生化指標(biāo)的影響，調(diào)節(jié)田間雌雄比例，將有利于指導(dǎo)生產(chǎn)實(shí)踐。
關(guān)于大麻性別，現(xiàn)在主要分為性狀鑒定和分子鑒定。早期鑒定主要以性狀鑒定為主，如《齊民要術(shù)》記載“凡種麻，用白麻子。止取實(shí)者，種斑黑麻子”,既色白、兩頭尖和較輕的是雄麻，而色黑、堅(jiān)實(shí)飽滿的是雌麻，古書《農(nóng)政全書》和《圖經(jīng)本草》亦是這樣記載[7]。但單從經(jīng)驗(yàn)性結(jié)論來看，不足以科學(xué)地支撐其雌雄性別鑒定的準(zhǔn)確性。分子標(biāo)記能直接反映DNA水平遺傳多樣性，與其他形態(tài)學(xué)、細(xì)胞學(xué)等標(biāo)記相比，更易于檢測、節(jié)省時(shí)間，且準(zhǔn)確性更高，還能提供更多的性別分化有益信息[8]。隨著現(xiàn)代分子技術(shù)的不斷更新與應(yīng)用，DNA分子標(biāo)記技術(shù)被認(rèn)為是雌雄異株性別鑒定的準(zhǔn)確且可靠的方法，因?yàn)槠洳皇苤参锷L階段的影響，還能打破傳統(tǒng)育種的局限性。據(jù)報(bào)道，分子技術(shù)的進(jìn)步為現(xiàn)代遺傳育種提供了更多種類的分子標(biāo)記技術(shù)，已廣泛應(yīng)用于大麻種質(zhì)遺傳多樣性和性別相關(guān)標(biāo)記研究中，如特別序列擴(kuò)增(Sequence characterized amplified regions, SCAR)、隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(Random amplified polymorphism of DNA,RAPD)、擴(kuò)增片段長度多態(tài)性(Amplified fragment length polymorphism, AFLP)、簡單序列重復(fù)(Simple sequence repeats, SSR)和單核苷酸多態(tài)性(Single nucleotide polymorphism, SNP)[8,9,10,11,12,13,14]。趙銘森等[9]利用3個(gè)雄性特異條帶開發(fā)了6個(gè)SCAR標(biāo)記，其MADC2-8性別檢測鑒定準(zhǔn)確率達(dá)98.34%；姜穎等[10]利用RAPD與SCAR標(biāo)記，獲得了一條869 bp的大麻雄性特異條帶；呂淑珍等[14]利用AFLP分子標(biāo)記獲得了一條348 bp的雄性特異條帶；Mandolino等[15]利用RAPD分子標(biāo)記，獲得了一條400 bp的雄性相關(guān)特異條帶。研究表明，利用分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)工業(yè)大麻進(jìn)行性別標(biāo)記是可行的。
插入/缺失(Insertion-deletion, InDel)是指在近緣種或同一種物種不同個(gè)體之間基因組同一位點(diǎn)的序列發(fā)生了不同大小核苷酸片段的插入或缺失，及一個(gè)序列上某一位點(diǎn)相比同源的另一個(gè)序列插入或缺失一個(gè)或多個(gè)堿基[16,17]。InDel標(biāo)記技術(shù)是基于PCR擴(kuò)增技術(shù)發(fā)展起來的，其本質(zhì)上屬于長度多態(tài)性標(biāo)記，但相較于其他分子標(biāo)記技術(shù)而言，InDel標(biāo)記在基因組中的分布更廣、密度更大、數(shù)目也更多，具有穩(wěn)定性更好、多態(tài)性高、分型系統(tǒng)簡單、設(shè)備要求限制低和通用性強(qiáng)等特點(diǎn)[17]。目前InDel標(biāo)記已應(yīng)用于動(dòng)植物群體遺傳分析、分子輔助育種、純度鑒定等領(lǐng)域[18,19,20,21,22,23],而InDel標(biāo)記技術(shù)在大麻染色體中的標(biāo)記報(bào)道較少。本文以大麻全基因組序列為基礎(chǔ)，通過對(duì)InDel識(shí)別區(qū)域性染色體序列信息的篩選，構(gòu)建InDel分子標(biāo)記技術(shù)，探究工業(yè)大麻性別連鎖標(biāo)記，為大麻早期性別標(biāo)記鑒定及性別表達(dá)研究奠定理論基礎(chǔ)，研究結(jié)果將有助于工業(yè)大麻早期性別快速鑒定，且為今后大麻性別連鎖標(biāo)記的遺傳結(jié)構(gòu)信息和實(shí)際應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
1材料與方法
1.1試驗(yàn)材料
試驗(yàn)選擇慶大麻1號(hào)(Q1)作為InDel標(biāo)記的篩選材料，以H8、籽用2、E-7、云麻7號(hào)(Y7)、C8×籽用2的F2群體和雌雄同株USO14作為InDel標(biāo)記的驗(yàn)證材料，7份工業(yè)大麻性別表型的鑒定材料如表1所示。試驗(yàn)所用工業(yè)大麻種質(zhì)均由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院麻類研究所一年生麻類育種研究室提供。
表1 7份大麻種質(zhì)資源表
1.2試驗(yàn)方法
1.2.1大麻基因組總DNA的提取純化及檢測
利用植物基因組DNA提取(離心柱型)試劑盒(北京天根生物科技有限公司),對(duì)大麻葉片進(jìn)行基因組總DNA提取，具體方法參見試劑盒說明書。用1%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行DNA純度檢測，并使用NanoDrop 2000對(duì)提取DNA進(jìn)行質(zhì)量和濃度檢測，暫存于-20℃冰箱。
1.2.2Indel標(biāo)記引物設(shè)計(jì)
根據(jù)Prentout D等[24]公布的大麻性染色體位于1號(hào)染色體的報(bào)道，本研究通過NCBI下載大麻全基因組序列(https： //www.ncbi, nlm.nih.gov/bioproject/PRJNA73819),選擇位于1號(hào)性染色體的序列信息，以每5 Mb的間隔選擇沿染色體分布的10個(gè)InDel識(shí)別區(qū)域序列信息，利用Primer 5.0進(jìn)行引物設(shè)計(jì)，依次命名為Is-01～I(xiàn)s-10,引物序列見表2。引物均由北京擎科生物科技有限公司(Tsingke Biotechnology Co.,Ltd.)合成。
表2 InDel引物及核苷酸序列(5′-3′)
1.2.3PCR擴(kuò)增
使用2×Es Taq MasterMix(Dye)(康為世紀(jì)),PCR擴(kuò)增反應(yīng)總體積10μL。其中6μL的2×Es Taq MasterMixDye,1.5 μL的Template DNA(800 ng/μL),上下游引物(10μmol/L)為1.0μL,1.5μL的ddH2O。PCR反應(yīng)循環(huán)程序?yàn)椋侯A(yù)變性94℃、3 min,變性94℃、30s,退火55℃、30s,延伸72℃、1min,35個(gè)循環(huán)；延伸72℃、5min,反應(yīng)結(jié)束后4℃冰箱保存。
1.2.4擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測
使用聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測擴(kuò)增產(chǎn)物，其中30%丙烯酰胺20mL,5×TBE溶液10 mL,超純水48mL,10%AP溶液1200μL,TEMED溶液66 μL。DYY-10c型電泳儀設(shè)置程序：電壓180V,電流300mA,定時(shí)70min。將凝膠放入0.4g AgNO3與400mL超純水混合液中，銀染6～8min,超純水洗1次；將凝膠放入6g NaHO、400mL超純水和4mL甲醛混合溶液中(可提前-20℃預(yù)冷5～10min),顯影10～30min,超純水洗7～9次。WD-9406型膠片觀察燈下觀察和拍照，保鮮膜封膠、貼標(biāo)簽留存。
使用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測擴(kuò)增引物，其中瓊脂糖1g,1×TAE溶液100mL,核酸染料5～7μL,DYY-10c型電泳儀設(shè)置程序同上，定時(shí)25min,且標(biāo)記所用Marker分子量標(biāo)準(zhǔn)均為GL DNA Marker 2000。將凝膠放入BIO-RAD凝膠成像儀中進(jìn)行觀察，并拍照留存。
1.2.5工業(yè)大麻植株表型鑒定
2020年將InDel標(biāo)記篩選材料Q1播種于人工氣候室(光照強(qiáng)度8000lux,長日照18h和65～70d后進(jìn)行短日照8h處理，室溫(25±5)℃,濕度60%～70%),待4對(duì)真葉完全展開后，采集大麻植株葉片，液氮速凍，并對(duì)采集植株掛牌標(biāo)識(shí)。將樣品利用植物組織研磨器(JXFSTPRP-24)粉碎，提取基因組總DNA,-20℃冰箱進(jìn)行保存。待鑒定的6份資源材料同樣種植于人工氣候室，花期觀察記錄雌株與雄株性別，吊牌標(biāo)識(shí)，并對(duì)每個(gè)品種雌雄株進(jìn)行取樣(3個(gè)重復(fù)),研磨后提取基因組DNA,暫存于4℃冰箱，用于性別表型驗(yàn)證。
2結(jié)果與分析
2.1大麻基因組總DNA的提取
本試驗(yàn)利用植物基因組DNA提取(離心柱型)試劑盒(北京天根)提取大麻基因組DNA,由于大麻含酚類物質(zhì)較多，在提取過程中相對(duì)延長了試驗(yàn)時(shí)間，步驟詳見說明書。紫外分光光度法檢測結(jié)果表明，基因組DNA的OD260/OD280值均在1.8～2.0,OD260/OD230值均在1.9～2.3,說明提取的DNA純度較高，酚類物質(zhì)污染較少，能夠滿足后續(xù)試驗(yàn)要求。1%瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果表明，大麻基因組DNA完整，帶型整齊無彌散，完整性好(圖1)。
圖1 大麻基因組總DNA提取
2.2大麻性別連鎖標(biāo)記引物的篩選
以Q1的雌雄單株DNA池為模板，分別對(duì)上述10對(duì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)聚丙烯凝膠電泳后進(jìn)行引物篩選，經(jīng)篩選后發(fā)現(xiàn)Is-02(5′-CGATTTCTTCTTTCTGCAAT-3′)和Is-08(5′-GTGCGATTTCTTCTTTCTGC -3′)能夠?qū)I(yè)大麻雌(Female)、雄(Male)性別進(jìn)行準(zhǔn)確鑒定。Is-02在工業(yè)大麻雌株中擴(kuò)增出一條約370bp的單一帶型，在雄株中擴(kuò)增出一條約370bp和199bp的雄性雙帶型(圖2a)；Is-08在工業(yè)大麻雌株中擴(kuò)增出一條約272bp單一帶型，在雄株中擴(kuò)增出一條約272bp和100bp的雄性雙帶型(圖2b),且出現(xiàn)的雌雄帶型清晰，分區(qū)明顯，雌雄單株重復(fù)的穩(wěn)定性高。
此外，分別將Is-02和Is-08PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳后，發(fā)現(xiàn)Is-02和Is-08也分別能在工業(yè)大麻雌株中擴(kuò)增出單一帶型(370bp、272bp),在雄株中擴(kuò)增出雙帶型(370bp和199bp,272bp和100bp)(圖3 c、d)。結(jié)果表明，兩份標(biāo)記物在瓊脂糖凝膠電泳中同樣適用于工業(yè)大麻雌雄株的性別鑒定。
圖2 Q1聚丙烯凝膠電泳
注：a、c為Is-02,b、d為Is-08。分子量標(biāo)準(zhǔn)GL2000 DNA ladder。
2.3與工業(yè)大麻雄性連鎖的InDel標(biāo)記引物的品種驗(yàn)證
2.3.1InDel分子標(biāo)記檢測工業(yè)大麻苗期性別
為驗(yàn)證Is-02和Is-08適用于工業(yè)大麻早期未知性別的鑒定，隨機(jī)選取HM05(C8×籽用2)F2群體24株幼苗葉片進(jìn)行DNA提取，以便于進(jìn)行InDel標(biāo)記。結(jié)果發(fā)現(xiàn)(圖3a、b),PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳后，HM30中2、5、8、10、11、15、16、17、19、21、23為雄株，其余均為雌株。利用該部分雌雄株DNA設(shè)置3個(gè)重復(fù)進(jìn)行聚丙烯凝膠電泳(圖3 c、d),試驗(yàn)結(jié)果與瓊脂電泳一致，經(jīng)核對(duì)相應(yīng)編號(hào)HM30群體F2花期性別表型，發(fā)現(xiàn)性別表型與InDel標(biāo)記結(jié)果一致。
2.3.2InDel分子標(biāo)記檢測工業(yè)大麻花期雌雄異株性別
為驗(yàn)證Is-02和Is-08對(duì)工業(yè)大麻雌雄性別的鑒定，對(duì)H8、Y7、籽用2雌雄異株、E-7全雌品種等開花期葉片進(jìn)行基因組DNA提取，設(shè)置不同樣本重復(fù)(5雌×5雄、6雌×6雄、12雌×12雄)進(jìn)行InDel標(biāo)記鑒定，結(jié)果如圖4所示。Is-02中籽用-2、H8、Y7中擴(kuò)增出片段大小相差171bp的雙帶型，為雄株，其余未出現(xiàn)雙帶型，但僅在370bp處有單一帶型的均為雌株；同理，在Is-08中擴(kuò)增出片段大小相差172bp的雙帶型，為雄株，僅在272bp處出現(xiàn)單一帶型的均為雌株。
此外，為驗(yàn)證兩份標(biāo)記物的重現(xiàn)性與穩(wěn)定性，將4份擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳后，結(jié)果表明(圖5),兩份標(biāo)記物在電泳檢測中都可對(duì)其進(jìn)行性別快速鑒定，而鑒定結(jié)果均與花期表型一致。由此說明，兩份標(biāo)記物可以有效鑒定工業(yè)大麻幼苗期雌雄性別，且準(zhǔn)確率可達(dá)100%。
圖3 InDel標(biāo)記物對(duì)HM30苗期性別檢測結(jié)果
注：a、c為Is-02,b、d為Is-08。分子量標(biāo)準(zhǔn)GL2000 DNA ladder。
圖4 工業(yè)大麻雌雄異株InDel標(biāo)記聚丙烯酰胺凝膠鑒定結(jié)果
注：a、b、c、d為Is-02,e、f、g、h為Is-08。分子量標(biāo)準(zhǔn)GL2000 DNA ladder。
圖5 工業(yè)大麻雌雄異株品種分析鑒定結(jié)果
注：a、b、c為Is-02,d、e、f為Is-08。分子量標(biāo)準(zhǔn)GL2000 DNA ladder。
2.3.3InDel分子標(biāo)記在工業(yè)大麻雌雄同株中的利用
為驗(yàn)證在工業(yè)大麻雌雄異株中獲得的兩份標(biāo)記物同樣適用于雌雄同株工業(yè)大麻，隨機(jī)選取12株雌雄同株USO14材料進(jìn)行DNA提取，經(jīng)PCR擴(kuò)增后，結(jié)果表明(圖6),兩份標(biāo)記物僅出現(xiàn)單一帶型(370bp,270bp),表明兩份標(biāo)記物同樣適用于雌雄同株材料的苗期雄化鑒定。
圖6 雌雄同株USO14分子鑒定結(jié)果
注：a、c為Is-02,b、d為Is-08。分子量標(biāo)準(zhǔn)GL2000 DNA ladder。
3討論與結(jié)論
工業(yè)大麻是一種雌雄異株植物，少數(shù)為雌雄同株，其全株具有重要的藥用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，在生產(chǎn)過程中通常根據(jù)植株性別進(jìn)行產(chǎn)業(yè)加工利用，但其性別在早期很難通過表型準(zhǔn)確鑒別。隨著分子標(biāo)記種類和應(yīng)用領(lǐng)域的不斷擴(kuò)大，SSR、RAPD、EST-SSR、ARFP等分子標(biāo)記已廣泛運(yùn)用于蘆筍[25]、番木瓜[26]、黃瓜[22]、野生大豆[27]、大麻[9,10,11,12,13,14,15],[18,28]和紅麻[29]等性別鑒定、基因定位、分子育種與遺傳多樣性分析等領(lǐng)域中。目前，已有學(xué)者通過分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)大麻性別鑒定進(jìn)行了相關(guān)報(bào)道，呂淑珍等[14]利用64對(duì)引物對(duì)10個(gè)大麻品種進(jìn)行AFLP標(biāo)記后，獲得一條348bp的雄性特異性條帶；姜穎等[10]利用42條RAPD引物在火麻一號(hào)中獲得了一條869bp雄性特異條帶，并命名為OPV-08,其合成的2條SCAR引物能夠有效鑒定大麻早期性別；陳其軍等[30]利用RAPD標(biāo)記從30份引物中獲得了一條約2.5kb雄性特異條帶，命名為S401,并將其轉(zhuǎn)化成重復(fù)性和特異性更好的SCAR標(biāo)記。但它們?cè)诖舐樾詣e連鎖中的形成過程與作用機(jī)理未得到進(jìn)一步驗(yàn)證，其中部分標(biāo)記手段存在重現(xiàn)性、穩(wěn)定性、特異性和分型等較差，缺乏功能性標(biāo)記的開發(fā)，在一定程度上限制了分子標(biāo)記在大麻遺傳育種中的應(yīng)用。與其他分子標(biāo)記相比，基于功能性插入和缺失(InDel)位點(diǎn)開發(fā)的基因特異性標(biāo)記，其準(zhǔn)確性高、通用性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、帶型清晰簡單、產(chǎn)物分離效果好，且不受遺傳背景影響，是分析標(biāo)記輔助育種中理想的分子標(biāo)記[8,17]。隨著現(xiàn)代測序技術(shù)的發(fā)展與大麻基因組數(shù)據(jù)信息的公布，為InDel標(biāo)記開發(fā)提供了很好的識(shí)別目標(biāo)基因組區(qū)域，從而有助于加快基于圖位克隆和性別標(biāo)記的大麻分子輔助育種的選擇。
工業(yè)大麻雌株藥用成分好，雄株纖維質(zhì)量高，種子可榨油、入藥等。生產(chǎn)上，保持合適的雌雄比例，可提高生產(chǎn)效率和經(jīng)濟(jì)效益。在本研究中，利用Is-02和Is-08在自然群體中進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果表明，在雌雄異株中擴(kuò)增出2條長度相差171bp或172bp的帶型，則為雄株，而僅擴(kuò)增出單一帶型且片段大小與雄株中擴(kuò)增帶型較長的一條一致的為雌株，即雄株中可擴(kuò)增出2條帶型，雌株僅擴(kuò)增出單一帶型；在F2群體、全雌化和雌雄同株中再次驗(yàn)證其準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性，與預(yù)期結(jié)果一致。這與Pan等[18]通過InDel標(biāo)記篩選出的Cs-I1-10和Cs-I1-15的雌雄帶型相似，這表明可以通過InDel分子標(biāo)記的方法鑒定出大麻性別，但在雌雄同株USO14的鑒定中，僅發(fā)現(xiàn)了單一帶型(272 bp, 370 bp)雌性標(biāo)記，表明所選植株性染色體均為XX型，這與姜穎等[10]在雌雄同株材料研究中的結(jié)果一致，均未找到雄性特異性帶型(即XY型),后續(xù)還需對(duì)雌雄同株品種進(jìn)行更多的種質(zhì)資源鑒定。
在本研究中，篩選出的Is-02和Is-08可在工業(yè)大麻早期未知性別、雌雄同株和雌化植株中標(biāo)記出單一帶型(272bp,370bp)雌性標(biāo)記，以及片段大小相差171bp或172bp的雙帶型雄性標(biāo)記。結(jié)果表明，Is-02和Is-08作為一個(gè)與工業(yè)大麻雄性連鎖緊密相連的標(biāo)記物，在植株幼苗生長期就可對(duì)其進(jìn)行早期性別鑒定，且鑒定準(zhǔn)確率可達(dá)100%。篩選出的標(biāo)記物被證明在廣泛的擴(kuò)增條件下，仍有極強(qiáng)的重現(xiàn)性，在退火溫度為48～62℃時(shí)，都可清楚看到雌雄帶型，不會(huì)因?yàn)闊嵫h(huán)變化影響最終結(jié)果，這也證明篩選出的兩對(duì)標(biāo)記物穩(wěn)定性較好，進(jìn)一步表明本研究獲得的兩對(duì)標(biāo)記物可為工業(yè)大麻遺傳育種和生產(chǎn)提供準(zhǔn)確的性別鑒定手段。
參考文獻(xiàn)
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文章摘自：陶杰,潘根,黃思齊,常麗,陳安國,唐慧娟,張翠萍,李德芳,李建軍,趙立寧.工業(yè)大麻性別連鎖Indel標(biāo)記的篩選與鑒定[J].中國麻業(yè)科學(xué),2022,44(03)：143-150+164.
