摘 要：根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例提供的苧麻根萃取物用于制備抗老化的醫(yī)藥或非醫(yī)藥組合物的用途，可提高線粒體及端粒酶的功能與活性，可保護(hù)線粒體免于氧化壓力的傷害，包含降低氫離子泄漏、提高合成三磷酸腺苷能力、提高預(yù)存耗氧能力、提高最大耗氧能力或提高三磷酸腺苷媒合效率。
權(quán)利要求書
1.一種苧麻根萃取物用于制備提高線粒體活性的醫(yī)藥或非醫(yī)藥組合物的用途，該苧麻根萃取物取自苧麻(Boehmeria nivea(L.)Gaud))的根部。
2.一種苧麻根萃取物用于制備提高端粒酶活性的醫(yī)藥或非醫(yī)藥組合物的用途，該苧麻根萃取物取自苧麻(Boehmeria nivea(L.)Gaud))的根部。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中該苧麻根萃取物降低線粒體的氫離子泄漏、提高線粒體的合成三磷酸腺苷能力、提高線粒體的預(yù)存耗氧能力、提高線粒體的最大耗氧能力或提高線粒體的三磷酸腺苷媒合效率。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其中該苧麻根萃取物提高BHI值((Bioenergetic Healthy Index)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其中該線粒體為骨骼肌細(xì)胞的線粒體。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其中該苧麻根萃取物包含對(duì)香豆酸及咖啡酸。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用途，其中對(duì)香豆酸對(duì)咖啡酸的重量比為10：1至30：1。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其中該苧麻根萃取物的濃度為50微克/毫升至700微克/毫升。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其中該苧麻根萃取物是將該苧麻的根部粉碎、以水浸泡，在60℃下使用水萃取12小時(shí)而獲得。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明關(guān)于苧麻根萃取物用于制備抗老化的組合物的用途。
背景技術(shù)
線粒體(Mitochondria)是細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷(ATP)的主要場(chǎng)所。由于三磷酸腺苷為細(xì)胞活動(dòng)的能量來源，所以線粒體又有“細(xì)胞能量工廠”之稱。除了為細(xì)胞提供能量外，線粒體還參與細(xì)胞分化、細(xì)胞信息傳遞和細(xì)胞凋亡等過程，并擁有調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)周期的能力。因此，線粒體被認(rèn)為與生物體的老化有密切的關(guān)系。
端粒(Telomere)是真核生物染色體末端的DNA重復(fù)序列，功能為保持染色體的完整性并控制細(xì)胞分裂周期。由于DNA復(fù)制機(jī)制上的限制，在染色體復(fù)制時(shí)，染色體末端的端粒無法被完全復(fù)制。一旦端粒消耗殆盡，細(xì)胞將會(huì)立即啟動(dòng)凋亡機(jī)制而死亡。
端粒酶(telomerase)是一種由RNA和蛋白質(zhì)組成的復(fù)合體，其可修復(fù)并延長(zhǎng)端粒，使端粒不因細(xì)胞分裂而耗損。通常只有在造血細(xì)胞、干細(xì)胞及生殖細(xì)胞才能檢測(cè)到高活性的端粒酶。因此，端粒酶也被認(rèn)為與生物體的老化有密切的關(guān)系。
由于線粒體與端粒的狀態(tài)均與細(xì)胞甚至生物體的老化有關(guān)。因此，如何保護(hù)與修復(fù)線粒體以維持線粒體功能并減緩線粒體崩解以及提高端粒酶的活性以延緩端粒耗損的速度已成為抗老化的重要課題。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明實(shí)施例提供利用苧麻根萃取物來提高線粒體活性的用途以及利用苧麻根萃取物來提升端粒酶活性的用途，以達(dá)到抗老化的目的。
本發(fā)明一實(shí)施例提供一種苧麻根萃取物用于制備提高線粒體活性的醫(yī)藥或非醫(yī)藥組合物的用途。
本發(fā)明一實(shí)施例提供一種苧麻根萃取物用于制備提高端粒酶活性的醫(yī)藥或非醫(yī)藥組合物的用途。
根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例提供的苧麻根萃取物用于制備抗老化的醫(yī)藥或非醫(yī)藥組合物的用途，可保護(hù)線粒體免于氧化壓力的傷害，以維持線粒體的功能與活性，包含降低氫離子泄漏、提高合成三磷酸腺苷能力、提高預(yù)存耗氧能力、提高最大耗氧能力、三磷酸腺苷媒合效率或提高BHI值，以達(dá)成抗老化的功效。根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例提供的苧麻根萃取物用于制備抗老化的組合物的用途，也可提高端粒酶活性，以修補(bǔ)端粒并延緩端粒耗損的速度，以達(dá)成抗老化的功效。
附圖說明
圖1為不同濃度的苧麻根萃取物的細(xì)胞毒性測(cè)試結(jié)果。
圖2為線粒體的克服氫離子泄漏耗氧量的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
圖3為線粒體的合成三磷酸線苷耗氧量的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
圖4為線粒體的預(yù)存耗氧量的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
圖5為線粒體的最大耗氧量的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
圖6為線粒體的三磷酸腺苷媒合效率的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
圖7為端粒酶活性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
具體實(shí)施方式
于以下實(shí)施方式中詳細(xì)敘述本發(fā)明的詳細(xì)特征及優(yōu)點(diǎn)，其內(nèi)容足以使本領(lǐng)域技術(shù)人員了解本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容并據(jù)以實(shí)施，且根據(jù)本說明書所揭露的內(nèi)容、權(quán)利要求書及附圖，本領(lǐng)域技術(shù)人員可輕易理解本發(fā)明相關(guān)的目的及優(yōu)點(diǎn)。以下實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明的觀點(diǎn)，但非以任何觀點(diǎn)限制本發(fā)明的范疇。
苧麻根為蕁麻科多年生草本植物苧麻(Boehmeria nivea(L .)Gaud，又稱Ramie)的根。在中醫(yī)上，具有止血、安胎、解毒等功效。苧麻根中主要包含對(duì)香豆酸、咖啡酸、綠原酸、金絲桃苷及蕓香苷等多酚及類黃酮成分。
以下簡(jiǎn)單說明本發(fā)明實(shí)施例所使用的苧麻根萃取物的萃取流程。首先，將苧麻根原料粉碎、以水浸泡2小時(shí)，在60℃下使用水萃取12小時(shí)，萃取三次。接著，依序經(jīng)過濃縮10倍、過濾、噴霧干燥(spray drying)、混合并粉末化、過濾、封裝，完成苧麻根萃取物。在本發(fā)明一實(shí)施例中，苧麻根萃取物的成分包含對(duì)香豆酸及咖啡酸，并保存于冷藏干燥的環(huán)境中，待使用時(shí)再將苧麻根萃取物以水配制成溶液使用。在本發(fā)明另一實(shí)施例中，苧麻根萃取物基本上由對(duì)香豆酸及咖啡酸組成。在本發(fā)明其他實(shí)施例中，除了對(duì)香豆酸及咖啡酸，苧麻根萃取物還包含綠原酸、金絲桃苷及蕓香苷等多酚及類黃酮成分。
在本發(fā)明一實(shí)施例中，對(duì)香豆酸對(duì)咖啡酸的重量比為15：1至25：1，但不以此為限。在本發(fā)明其他實(shí)施例中，對(duì)香豆酸對(duì)咖啡酸的重量比為10：1至30：1。在本發(fā)明其他實(shí)施例中，對(duì)香豆酸對(duì)咖啡酸的重量比為19：1至21：1。
在本發(fā)明一實(shí)施例中，當(dāng)將濃度為50微克/毫升至700微克/毫升的苧麻根萃取物提供給細(xì)胞，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的苧麻根萃取物可保護(hù)并修復(fù)線粒體的內(nèi)膜以提升線粒體活性。如此一來，在線粒體內(nèi)膜進(jìn)行的氧化磷酸化反應(yīng)以合成三磷酸腺苷的效率得到提升。詳細(xì)來說，經(jīng)苧麻根萃取物處理過的線粒體進(jìn)行氧化磷酸化反應(yīng)合成的三磷酸腺苷數(shù)量提高，線粒體的基礎(chǔ)耗氧量提高，線粒體內(nèi)膜的氫離子泄漏量降低，線粒體的最大耗氧能力提高，線粒體的預(yù)存耗氧能力提高，線粒體的三磷酸腺苷媒合效率提高。在一較佳實(shí)施例中，苧麻根萃取物的濃度可為100微克/毫升至650微克/毫升。在一更佳實(shí)施例中，苧麻根萃取物的濃度可為180微克/毫升至520微克/毫升。在另一更佳實(shí)施例中，苧麻根萃取物的濃度可為200微克/毫升至500微克/毫升。
在本發(fā)明另一實(shí)施例中，當(dāng)將濃度為50微克/毫升至700微克/毫升的苧麻根萃取物提供給細(xì)胞，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的苧麻根萃取物可提升端粒酶的活性。如此一來，活性受到提升的端粒酶可修補(bǔ)端粒，借以延緩端粒耗損的速度。在一較佳實(shí)施例中，苧麻根萃取物的濃度可為100微克/毫升至650微克/毫升。在一更佳實(shí)施例中，苧麻根萃取物的濃度可為180微克/毫升至520微克/毫升。在另一更佳實(shí)施例中，苧麻根萃取物的濃度可為250微克/毫升至500微克/毫升。
因此，借由將苧麻根萃取物提供給細(xì)胞可增加線粒體活性以及增加端粒酶活性，以達(dá)成抗老化的功效。
將苧麻根萃取物提供給細(xì)胞的方法，例如為以食用的方式由口攝取苧麻根萃取物。以食用的方式將苧麻根萃取物提供給細(xì)胞時(shí)，苧麻根萃取物的有效劑量為2.162克至5.406克。此處的有效劑量根據(jù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的有效劑量與人體公斤數(shù)的換算公式進(jìn)行換算得到。換算公式如下：人體有效劑量＝細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的有效劑量×小鼠體重×折算系數(shù)×人體公斤數(shù)。折算系數(shù)由動(dòng)物與人體的每公斤體重劑量折算系數(shù)表查表得到。當(dāng)小鼠體重為20克以及人體公斤數(shù)為60公斤時(shí)，折算系數(shù)為9.01。
為方便以食用的方式由口攝取苧麻根萃取物，苧麻根萃取物可制成例如液體狀、固體狀、顆粒狀、粉體狀、糊狀或凝膠狀的苧麻根萃取物加工品。在本發(fā)明部分實(shí)施例中，在不影響本發(fā)明所能產(chǎn)生的功效及所能達(dá)成的目的下，苧麻根萃取物加工品也可包含其它成份或添加物，例如載劑、稀釋劑、輔劑、賦形劑或呈味劑。賦形劑可使制劑方便實(shí)用，而呈味劑可提升制劑的風(fēng)味。
賦形劑例如為小麥淀粉、米淀粉、玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、糊精、環(huán)糊精等淀粉類；結(jié)晶纖維素類；乳糖、葡萄糖、砂糖、還原麥芽糖、飴糖、果寡糖、乳化寡糖等糖類；山梨糖醇、赤藻糖醇、木糖醇、乳糖醇、甘露醇等糖醇類。
呈味劑例如為龍眼萃取物、荔枝萃取物、柚子萃取物等各種果汁萃取物；蘋果汁、橘子汁、檸檬汁等各種果汁；桃子香料、梅子香料、酸乳酪香料等各種香料；乙?；前匪徕?、蔗糖素、赤藻糖醇、寡糖類、甘露糖、木糖醇、異構(gòu)化糖類等各種甜味劑；檸檬酸、蘋果酸、酒石酸、葡萄糖酸等各種酸味劑；綠茶、烏龍茶、巴拿巴茶(Banaba tea)、杜仲茶、鐵觀音茶、薏苡茶、七葉膽茶、茭白茶、昆布茶等各種茶成分等。
再者，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的苧麻根萃取物的組合物可為醫(yī)藥或非醫(yī)藥組合物也可為健康食品。苧麻根萃取物或是包含苧麻根萃取物的組合物也可包覆于膠囊中以方便由口攝取苧麻根萃取物。苧麻根萃取物或是包含苧麻根萃取物的組合物可以干燥粉末的形式被包覆于硬膠囊中。苧麻根萃取物或是包含苧麻根萃取物的組合物也可以溶液狀、懸浮液狀、糊狀、粉末狀或顆粒狀的形式被包覆于軟膠囊中。
軟膠囊中用于溶解或分散苧麻根萃取物的油脂類例如為萼梨油、杏仁油、亞麻仁油、小茴香油、白蘇油、橄欖油、橄欖角鯊烯、甜橙油、胸棘鯛油(orange roughy oil)、芝麻油、蒜油、可可脂、南瓜子油、洋甘菊油、胡蘿卜油、胡瓜油、牛油脂肪酸、夏威夷核果油、越橘子油、糙米胚芽油、大米油、小麥胚芽油、紅花油、牛油樹油脂、液狀牛油樹油脂、紫蘇油、大豆油、月見草油、山茶油、玉米油、菜子油、鋸葉棕萃取油((saw palmetto extract oil)、薏苡油、桃仁油、洋芹子油、蓖麻油、葵花子油、葡萄子油、琉璃苣油、澳洲胡桃油、繡線菊油(meadowfoam oil)、棉子油、花生油、龜油、貂油、蛋黃油、魚油、棕櫚油、棕櫚仁油、木蠟、椰子油、長(zhǎng)鏈/中鏈/短鏈的脂肪酸三甘油酯、二酸甘油酯、牛油、豬油、角鯊烯、角鯊?fù)?、姥鮫烷、以及該等油脂類的氫化物等。其中，琉璃苣油與月見草油含有大量伽瑪亞麻油酸(Gamma Linolenic Acid，GLA)，伽瑪亞麻油酸屬于人體必須脂肪酸，其具有保濕、促進(jìn)細(xì)胞再生以及提升棕脂(Brown Fat)活躍度以促進(jìn)脂肪燃燒的功能。
此外，著色劑、防腐劑、增粘劑、結(jié)合劑、崩解劑、分散劑、穩(wěn)定劑、膠化劑、抗氧化劑、界面活性劑、防腐劑、pH值調(diào)整劑等符合政府單位規(guī)定的添加物也可依照政府單位規(guī)定的劑量標(biāo)準(zhǔn)與加工生產(chǎn)的需求添加于苧麻根萃取物加工品中。
以下說明使用本發(fā)明實(shí)施例的苧麻根萃取物制備的醫(yī)藥或非醫(yī)藥組合物用于提高線粒體活性的功效。
實(shí)施例一為濃度200微克/毫升的苧麻根萃取物溶液，實(shí)施例二為濃度250微克/毫升的苧麻根萃取物溶液，實(shí)施例三為濃度500微克/毫升的苧麻根萃取物溶液。
以下實(shí)驗(yàn)所使用的細(xì)胞為骨骼肌細(xì)胞(C2C12)。使用含有10％胎牛血清(Fetal Bovine Serum，F(xiàn)BS)的DMEM培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)。以下說明細(xì)胞繼代的方式。首先，將細(xì)胞培養(yǎng)至一定量再將培養(yǎng)液移除，再以磷酸鹽緩沖液(PBS)潤(rùn)洗細(xì)胞兩次。接著，加入胰蛋白酶(trypsin)，在37℃下與細(xì)胞作用5分鐘，隨后加入培養(yǎng)液以中止胰蛋白酶作用。接著，以300g(相對(duì)離心力，relative centrifugal force，RCF)離心5分鐘，移除上清液，再以培養(yǎng)液回溶。最后，于細(xì)胞培養(yǎng)瓶(175Tflask)細(xì)胞計(jì)數(shù)為1×106個(gè)細(xì)胞。
首先，進(jìn)行苧麻根萃取物的細(xì)胞毒性的測(cè)試。阿爾瑪藍(lán)(Alamar blue)用于檢測(cè)細(xì)胞存活率的檢測(cè)試劑。檢測(cè)套組內(nèi)的刃天青(resazurin)是一種氧化還原指示劑，其為無毒、可穿透細(xì)胞膜且低熒光性的深藍(lán)色染料。當(dāng)刃天青進(jìn)入健康的細(xì)胞中，會(huì)因活細(xì)胞體內(nèi)的還原環(huán)境而被還原成粉紅色且具高熒光性的試鹵靈(resorufin)。可借由量測(cè)試鹵靈的光吸收值或熒光值來評(píng)估細(xì)胞的存活率。試鹵靈的光吸收值或熒光值愈高，表示細(xì)胞存活率愈高。細(xì)胞存活率愈高表示細(xì)胞愈健康、增生能力愈強(qiáng)。細(xì)胞增生能力愈強(qiáng)，表示細(xì)胞量愈多。因此，阿爾瑪藍(lán)可作為細(xì)胞毒性的指標(biāo)，借以得知細(xì)胞存活率及細(xì)胞增生率。
以下詳細(xì)說明苧麻根萃取物的細(xì)胞毒性的測(cè)試流程。第一天，在96孔盤中以細(xì)胞與培養(yǎng)液的總體積為200微升且每孔10000個(gè)細(xì)胞的條件將細(xì)胞培養(yǎng)一天。第二天，加入苧麻根萃取物，使孔中苧麻根萃取物的濃度為25、50、100、150、200、250、500、1000微克/毫升，在37℃下將細(xì)胞培養(yǎng)一天。使用的苧麻根萃取物包含對(duì)香豆酸及咖啡酸，且對(duì)香豆酸對(duì)咖啡酸的重量比為20.9：1。第三天，使用阿爾瑪藍(lán)(Alamar blue)進(jìn)行細(xì)胞毒性的檢測(cè)。詳細(xì)來說，將阿爾瑪藍(lán)在避光的環(huán)境下配制成10％(重量百分濃度)的溶液，將其以每孔100微升的體積加入孔盤中，在37℃下與細(xì)胞一起培養(yǎng)3至4小時(shí)，最后以分光光度計(jì)(ELISAreader)測(cè)量吸收值與熒光值(OD530/590)，獲得經(jīng)過苧麻根萃取物處理后的細(xì)胞存活率，以代表苧麻根萃取物對(duì)于細(xì)胞的毒性。
以下說明苧麻根萃取物的細(xì)胞毒性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
請(qǐng)參考圖1，圖1為不同濃度的苧麻根萃取物的細(xì)胞毒性測(cè)試結(jié)果。控制組為未以苧麻根萃取物處理的細(xì)胞，縱軸為相對(duì)于控制組的細(xì)胞存活率，**(P<0.011)表示相對(duì)控制組具有顯著差異。
在苧麻根萃取物的細(xì)胞毒性的測(cè)試中，如圖1所示，僅濃度為1000微克/毫升的苧麻根萃取物造成細(xì)胞存活率降低，而濃度為500微克/毫升以下的苧麻根萃取物對(duì)細(xì)胞存活率并無影響，表示濃度為500微克/毫升以下的苧麻根萃取物對(duì)于細(xì)胞并無細(xì)胞毒性。據(jù)此，選擇200、250、500微克/毫升的苧麻根萃取物作為本發(fā)明實(shí)施例一至三來進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
接下來，進(jìn)行使用苧麻根萃取物提高線粒體活性的實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)中使用過氧化三級(jí)丁醇(tert butyl hydroperoxide，tBHP)作為誘導(dǎo)細(xì)胞氧化壓力損傷、老化以及抑制線粒體活性的物質(zhì)。
以下詳細(xì)說明苧麻根萃取物提高線粒體活性的實(shí)驗(yàn)流程。第一天，在24孔海馬盤中以細(xì)胞與培養(yǎng)液的總體積為100微升且每孔25000個(gè)細(xì)胞的條件將細(xì)胞培養(yǎng)4小時(shí)后，再加入150微升的培養(yǎng)液，將其培養(yǎng)一天。第二天，加入苧麻根萃取物，使孔中苧麻根萃取物的濃度為200、250、500微克/毫升且孔中溶液的總體積為250微升，以此條件將細(xì)胞與苧麻根萃取物培養(yǎng)一天。第三天，于各孔加入100μM的過氧化三級(jí)丁醇(tert butyl hydroperoxide，tBHP)與細(xì)胞作用1小時(shí)，接著將孔盤中的培養(yǎng)液置換為675微升的上機(jī)培養(yǎng)液(不含胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液)，在無二氧化碳的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1小時(shí)后，以海馬生物能量測(cè)定儀量測(cè)孔中細(xì)胞的氧氣消耗量。
海馬生物能量測(cè)定儀的測(cè)量原理與流程如下。首先，檢測(cè)孔中細(xì)胞的基礎(chǔ)耗氧量。接著，加入三磷酸線苷合成酶抑制劑以抑制線粒體產(chǎn)生三磷酸線苷，此時(shí)減少的耗氧量即為合成三磷酸線苷的耗氧量。接著，加入適當(dāng)濃度的抗耦合劑，在不破壞線粒體內(nèi)膜的電子傳遞鏈的情況下，讓線粒體以極限狀況空轉(zhuǎn)以評(píng)估線粒體的最大耗氧能力。最后，加入電子傳遞鏈抑制劑以完全關(guān)閉線粒體的耗氧，借此確認(rèn)量測(cè)的背景值，即是非線粒體耗氧量。線粒體的基礎(chǔ)耗氧量等于細(xì)胞的基礎(chǔ)耗氧量減去非線粒體耗氧量。線粒體的基礎(chǔ)耗氧量減去合成三磷酸線苷消耗的氧氣量等于克服氫離子泄漏的耗氧量。線粒體的最大耗氧量減去線粒體的基礎(chǔ)耗氧量等于線粒體的預(yù)存耗氧量。線粒體的三磷酸線苷媒合效率等于合成三磷酸線苷耗氧量除以線粒體的基礎(chǔ)耗氧量。
BHI(Bioenergetic Healthy Index)為使用海馬生物能量?jī)x(Seahorse Bioscience XFe Analyzer)檢測(cè)細(xì)胞中線粒體的能量代謝數(shù)據(jù)，并以線粒體的能量代謝數(shù)據(jù)作為參數(shù)所計(jì)算出的能量代謝評(píng)估指標(biāo)。BHI＝[合成三磷酸線苷的耗氧量×預(yù)存耗氧量]/[克服氫離子泄漏的耗氧量×非線粒體耗氧量]。細(xì)胞的BHI越高代表的是細(xì)胞中線粒體的功能越強(qiáng)，而功能越強(qiáng)的線粒體通常是越年輕的線粒體。因此，BHI被用作評(píng)估線粒體老化程度的指標(biāo)。
以下說明使用本發(fā)明的苧麻根萃取物制備的醫(yī)藥或非醫(yī)藥組合物于提高線粒體活性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
請(qǐng)參考圖2至圖6及表1，圖2為線粒體的克服氫離子泄漏耗氧量的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，圖3為線粒體的合成三磷酸線苷耗氧量的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，圖4為線粒體的預(yù)存耗氧量的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，圖5為線粒體的最大耗氧量的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，圖6為線粒體的三磷酸腺苷媒合效率的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，表1為各實(shí)驗(yàn)結(jié)果的數(shù)據(jù)。在圖2至圖5中，縱軸為每分鐘消耗的氧氣皮摩爾數(shù)，在圖6中，縱軸以百分比(％)表示三磷酸線苷媒合效率。控制組為未經(jīng)過氧化三級(jí)丁醇及苧麻根萃取物處理的正常細(xì)胞，比較組為以100μM的過氧化三級(jí)丁醇處理的受損細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)組一至三分別為經(jīng)實(shí)施例一的200微克/毫升、實(shí)施例二的250微克/毫升、實(shí)施例三的500微克/毫升的苧麻根萃取物處理后再以100μM的過氧化三級(jí)丁醇使其受損的細(xì)胞。#(P<0.05)、(P<0.01)表示相對(duì)控制組具有顯著差異，*(P<0.05)、**(P<0.01)***(P<0.001)表示相對(duì)比較組具有顯著差異。
表1
在使用苧麻根萃取物提高線粒體活性的實(shí)驗(yàn)中，通過線粒體的耗氧量以判斷線粒體的功能與活性。如圖2所示，就線粒體克服氫離子泄漏的耗氧量而言，比較組高于控制組，而經(jīng)實(shí)施例一至三的苧麻根萃取物處理的實(shí)驗(yàn)組低于比較組且接近控制組。如圖3所示，就線粒體合成三磷酸線苷耗氧量而言，比較組低于控制組，而經(jīng)實(shí)施例一至三的苧麻根萃取物處理的實(shí)驗(yàn)組高于比較組且接近控制組。如圖4所示，就線粒體的預(yù)存耗氧量而言，比較組低于控制組，而經(jīng)實(shí)施例一至三的苧麻根萃取物處理的實(shí)驗(yàn)組高于比較組且接近控制組。如圖5所示，就線粒體的最大耗氧量而言，比較組低于控制組，而經(jīng)實(shí)施例一至三的苧麻根萃取物處理的實(shí)驗(yàn)組高于比較組且接近控制組。如圖6所示，就線粒體的三磷酸線苷媒合效率而言，比較組低于控制組，而經(jīng)實(shí)施例一至三的苧麻根萃取物處理的實(shí)驗(yàn)組高于比較組且接近控制組。如表1所示，就線粒體的BHI值而言，比較組低于控制組，而經(jīng)實(shí)施例一至三的苧麻根萃取物處理的實(shí)驗(yàn)組高于比較組且接近控制組。
根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，顯示出比較組的線粒體的內(nèi)膜受損，需要消耗更多氧氣以克服氫離子泄漏，且線粒體的合成三磷酸腺苷能力、預(yù)存耗氧能力及最大耗氧能力皆降低，三磷酸腺苷媒合效率也降低。相較于比較組，實(shí)驗(yàn)組中經(jīng)實(shí)施例一至三的苧麻根萃取物處理的線粒體的活性因苧麻根萃取物而提高，相當(dāng)于苧麻根萃取物在氧化壓力下具有保護(hù)與修復(fù)線粒體的用途，故線粒體內(nèi)膜受到的損傷程度較小。損傷較小表示線粒體克服氫離子泄漏所需的氧氣較少，故在基礎(chǔ)耗氧量中合成三磷酸腺苷所使用的耗氧量比例提高，使得線粒體合成三磷酸腺苷能力提高，三磷酸線苷媒合效率也因此提高。線粒體的最大耗氧能力為線粒體在氧化壓力下可達(dá)到的最大輸出，相較于比較組，實(shí)驗(yàn)組中經(jīng)實(shí)施例一至三的苧麻根萃取物處理的線粒體的最大耗氧能力有所提升且接近控制組的正常細(xì)胞的最大耗氧能力。最大耗氧量與基礎(chǔ)耗氧量的差值為預(yù)存耗氧量，相較于比較組，實(shí)驗(yàn)組中經(jīng)實(shí)施例的苧麻根萃取物處理的線粒體的預(yù)存耗氧能力有所提升且接近控制組的正常細(xì)胞的預(yù)存耗氧能力，代表線粒體受到氧化壓力時(shí)能夠應(yīng)對(duì)氧化壓力的能力提高。BHI值提高，代表線粒體整體抗老化的能力提升。綜上，在經(jīng)本發(fā)明實(shí)施例的苧麻根萃取物處理過的細(xì)胞中，線粒體的合成三磷酸腺苷能力、預(yù)存耗氧能力及最大耗氧能力皆提高，三磷酸腺苷媒合效率及BHI值也提高。
以下詳細(xì)說明苧麻根萃取物提高端粒酶活性的實(shí)驗(yàn)流程。第一天，在6孔盤中以每孔200000個(gè)細(xì)胞的條件將細(xì)胞培養(yǎng)一天。第二天，加入苧麻根萃取物，使孔中的苧麻根萃取物的濃度為250、500微克/毫升，在37℃下將細(xì)胞培養(yǎng)一天。第三天，使用TeloTAGGGTM Telomerase PCR ELISA kit(Roche)收取細(xì)胞RNA，并依依TeloTAGGGTM Telomerase PCR ELISA kit(Roche所附的操作步驟進(jìn)行聚合酶連鎖反應(yīng)(polymerase chain reaction， PCR)，將反應(yīng)所得的cDNA存放于4℃冰箱。第四天，使用用TeloTAGGGTM Telomerase PCR ELISA kit進(jìn)行端粒酶活性測(cè)量。詳細(xì)來說，首先利用PCR將TAGGG的端粒序列放大作為PCR產(chǎn)物。接著，使用TeloTAGGGTM Telomerase PCR ELISA kit所附的雜交探針及抗體與PCR產(chǎn)物反應(yīng)并呈色，量測(cè)在450納米的吸光值。吸光值愈大，表示受到端粒酶保護(hù)的端粒序列愈多，進(jìn)而表示端粒酶的活性愈強(qiáng)。
以下說明使用本發(fā)明的苧麻根萃取物制備的醫(yī)藥或非醫(yī)藥組合物于提高端粒酶活性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
請(qǐng)參考圖7及表2，圖7為端粒酶活性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。在圖7中，縱軸為相較于控制組的吸光值的倍數(shù)，以表示相較于控制組的端粒酶活性的倍數(shù)。*(P<0.05)、**(P<0.01)表示相對(duì)控制組具有顯著差異。控制組為未經(jīng)苧麻根萃取物處理的細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)組四至五分別為經(jīng)實(shí)施例二之250微克/毫升、實(shí)施例三之500微克/毫升的苧麻根萃取物處理的細(xì)胞。
表2
根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，相較于控制組，經(jīng)實(shí)施例二及實(shí)施例三的苧麻根萃取物處理的實(shí)驗(yàn)組的端粒酶的活性提高，表示端粒酶修補(bǔ)端粒的能力提高，進(jìn)而可延緩端粒耗損的速度。
根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例提供的苧麻根萃取物用于制備抗老化的醫(yī)藥或非醫(yī)藥組合物的用途，可保護(hù)線粒體免于氧化壓力的傷害，以維持線粒體的功能與活性，包含降低氫離子泄漏、提高合成三磷酸腺苷能力、提高預(yù)存耗氧能力、提高最大耗氧能力、提高三磷酸腺苷媒合效率或提高BHI值，以達(dá)成抗老化的功效。根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例提供的苧麻根萃取物用于制備抗老化的組合物的用途，也可提高端粒酶活性，以修補(bǔ)端粒并延緩端粒耗損的速度以達(dá)成抗老化的功效。
摘自國家發(fā)明專利，發(fā)明人：鄭漢中，楊舜杰，鄭安玲，申請(qǐng)?zhí)?/font>：202110996801.8，申請(qǐng)日：2021.08.27
